96T 氯霉素ELISA试剂盒

REAGEN氯霉素ELISA试剂盒，检测是否存在氯霉素以及氯霉素的含量，售后售前技术指导，技术人员可现场指导进行试验。，全国最早一批食品检测公司，服务有保障，产品灵敏度高。

深圳容金科技有限公司是一家产学研相结合、科工贸一体化的，集临床、食品安全及动物防疫检验试剂的研发、生产、销售及技术服务为一体的大型生物高科技企业。公司目前有近 20余位博士、硕士、留学归国人员，技术力量雄厚。 公司自成立以来，不断加快科技创新和自主品牌建设步伐，打造企业核心竞争力，企业综合实力得到快速提升。目前已经建成生命科学研究中涉及的多个实验技术平台，如 RT-PCR、实时荧光定量 PCR、ELISA、Western Blot、SouthernBlot、Confocol、Flow Cytometry、HPLC、免疫组织化学、免疫荧光、测序、基因芯片等技术平台。同时公司重视营造以人为本的企业文化，着力构建和谐企业。凭着“以质量求生存，以服务求发展”的经营理念和“诚信服务”赢得了广大友人的厚爱，公司的产品不断推陈出新，产品结构也在不断地调整优化。作为一个朝气蓬勃，积极向上，富有活力的年轻企业，公司具备了良好的企业文化，创新的战略构想，强大的科研实力和的管理理念，公司已经发展成为规模大，品种齐全，现代多元化集团公司。我们公司力求与客户建立良好联系，并承诺在客户所服务的领域提供有力的支持和满意的售后服务。 随着我国经济不断的高速发展，公司正面临着良好的契机，我们感谢战斗在一线的临床及科研工作者，并诚挚的邀请您一起为美好的明天奋斗，共创辉煌！

REAGEN™ 氯霉素酶联免疫反应测试盒说明书

RND99001

1．概述

REAGEN™氯霉素ELISA试剂盒酶联免疫反应测试盒利用竞争性酶联免疫反应原理，对鱼、虾、肉（牛肉、鸡肉、猪肉）、鸡蛋、蜂蜜、炼奶、牛奶、奶粉等中氯霉素的残留进行定量检测。检测肉样时此试剂盒提取方法也可选择与AOZ、AMOZ、SEM、AHD的五合一前处理方法统一处理一个样品，而同时检测几个项目。该试剂盒有以下特点：

Ø 高回收率(80-115%以上)，快速(10-40分钟之内完成提取过程)低成本提取。

Ø 检测限0.05ng/g 。

Ø 检测过程只需要不到1小时。

Ø 高重复性。

Ø 五合一处理方法更省时、经济、环保。

2．氯霉素ELISA试剂盒原理

REAGEN™氯霉素酶联免疫反应测试盒基于竞争性酶联反应原理，将氯霉素的蛋白偶联物包被于微孔板上。药物分析时，样品、酶标二抗以及氯霉素抗体都被加入到微孔中，如果样品中含有CAP，会竞争CAP抗体，抑制酶标板上的氯霉素与氯霉素抗体结合，同时酶标二抗与氯霉素抗体结合型成符合物。加入底物后，产物的颜色强弱与样品中CAP的浓度成反比。

3. 氯霉素ELISA试剂盒组成

已包被抗体的酶标板(CAP-coated Plate)（可拆式）............. 12×8 孔

标准液(Standards)（0，0.05，0.15，0.5，1.5，4.5ppb） 6×1.0mL

回收用10ppb(Spiking)（可选） 1×1.0ml

CAP 一抗(Antibody #1) 1×6mL

酶标二抗(HRP Conjugated Antibody #2) 1×6mL

10×样品提取液(Sample Extraction Buffer) 1×25mL

20×浓缩洗液(Wash Solution) 1×30mL

终止液(Stop Buffer) 1×12mL

TMB底物(TMB Substrate)      1×12mL

本试剂盒应当在2-8℃的温度下储存，有效期为一年。如果超过3个月不使用试剂盒，

请将一抗和酶标二抗放置-20℃或者冰冻保存。

4.检测定量限

5.交叉反应：

6．未提供的设备或材料

1) 酶标仪

2) 恒温培养箱

3) 移液器(10、20和100mL，1mL各一支)

4) 氮吹仪

5) 漩涡振荡器

6) 匀质器

7) 多道移液器（50-300mL）

8) 乙酸乙酯

9) 正己烷

7.注意事项

实验前请阅读以下文字，以保证获得最佳实验效果。

1) 标准品中含有氯霉素，请小心使用。

2) 不要使用过期的试剂盒。

3) 不同批次的试剂盒不要混用，抗体和微孔板具有盒与批次的特异性。

4) 尽量保持室温20-25℃，避免在通风口操作防止温度过低，过热和/或者蒸发。同样的，不要在阳光直射下实验，防止过热及蒸发。在孵育期间，如果工作台温度过低，应该铺垫若干纸巾或者其他物料。

5) 水质量很重要，确保使用蒸馏或者去离子水。

6) 加入样品或者试剂到空的微孔板时，吸嘴靠于微孔接近底部，并保持接触。

7) 孵育时间的计算越规范越好，保持添加标准品的一致性，先添加标准品后添加样品。

8) 从低浓度到高浓度地添加标准品，降低影响标准品曲线质量的风险。

9) 将微孔板置于放有干燥剂的密封袋中，冷藏保存。

8．试剂的准备

所有的试剂在使用之前应将其回温至室温，并在使用试剂前摇动几下，以保证合理的浓度。

（1）1×工作洗液

按1：19的比例配制浓缩洗液和蒸馏水。举例：取10ml的20X浓缩洗液加入到190ml双蒸馏水中，配制成200ml的1X工作洗液，按需要，可同比例放大或缩小。

（2）1×样品提取液

按1：9的比例配制样品提取浓缩液和蒸馏水。举例：取1ml的10X样品提取液加入到9ml双蒸馏水中，配制成10ml的1X样品提取液，按需要，可同比例放大或缩小。

9．样品的准备

1） 鱼/虾/肉（牛肉/鸡肉/猪肉）/鸡蛋

（1） 取适量样品用匀浆器匀浆；

（2） 称3g的匀质样品加6mL乙酸乙酯，以最大转速涡旋振荡3分钟；

（3） 室温（22.5±2.5）°C下离心力4000g离心5分钟；

（4） 移取4mL乙酸乙酯上清液（相当于2g原始样品），在60-70 ℃下减压蒸馏

或者60-70 ℃水浴氮气吹干；

（5） 加入2mL 正己烷溶解干燥物；

（6） 加入1mL的1×样品提取液，最大转速涡旋振荡2分钟；

室温（22.5±2.5）°C下离心力4000g离心10分钟，去除上层正己烷层；

（7） 每孔取50µL下层液，进行样品测试。

稀释倍数：0.5

鱼/虾/肉（牛肉/鸡肉/猪肉）五合一前处理方法：

（1） 使用适当匀浆器匀浆样品；

（2） 称取1g匀质样品加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL蒸馏水，0.5mL 1M HCl和20µL50 mM 2-硝基苯甲醛，涡旋震荡30秒；

（3） 50°C恒温培养3小时，培养期间，每小时振荡5秒；（说明书后**标记方法可供选择）

（4） 加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH， 6 mL 乙酸乙酯，涡旋震荡振荡5分钟；

（5） 室温（22.5±2.5）°C下离心力4000g离心10分钟；

（6） 取3mL上清液(包含0.5g的原始样品)到另一试管（避免触及下层水相！如果移取液中

含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），如果出现乳化现象，上清液不足3mL，请85℃水浴3分钟。在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（7） 用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；（注：由于肝脏组织富含脂肪、色素等，为防止乳化现象发生，建议选用4mL正己烷溶解，涡旋震荡30秒后，再进行下一步操作）

（8） 加入1mL1×样品提取液，剧烈振荡2分钟；

（9） 室温（22.5±2.5）°C下离心力4000g离心10分钟；

（10） 每孔取50µL下清液，进行样品测试。

稀释倍数：2

2） 蜂蜜

（1） 称2g蜂蜜样品，加入4mL蒸馏水于一离心管中；

（2） 加入4mL乙酸乙酯，以最大转速涡旋振荡3分钟；

（3） 室温（22.5±2.5）°C下离心力4000g离心5分钟；

（4） 取1mL上清液（相当于0.5g原始样品），60-70℃水浴减压蒸馏干燥，或者在60-70 ℃水浴氮气吹干；

（5）   用2 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（6）   加入0.5mL1×样品提取液溶解干燥物，最大速度涡旋振荡2分钟；

（7）   室温（22.5±2.5）°C下离心力4000g离心10分钟；

（8） 每孔取50 µL下清液，进行样品测试。

稀释倍数：1.0

3) 炼奶

（1） 称取1g样本，加入1mL水，涡旋振荡混匀后再加入6mL乙酸乙酯，涡旋振荡3分钟；

（2） 室温（22.5±2.5）°C下离心力4000g离心5分钟；

（3） 移取3mL上层溶液（相当于0.5g样本）到另一试管，60-70℃水浴减压蒸馏，或者在60-70 ℃水浴氮气吹干；

（4） 用2 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（5）   加入0.5mL1×样品提取液溶解干燥物，最大速度涡旋振荡2分钟；

（6）   室温（22.5±2.5）°C下离心力4000g离心10分钟；

（7） 每孔取50 µL下清液，进行样品测试。

稀释倍数：1.0

4） 牛奶

（1） 取1mL牛奶样品，加入5mL乙酸乙酯溶液，最大速度涡旋振荡3分钟；

（2） 室温（22.5±2.5）°C下离心力4000g离心5分钟；

（3） 移取2.5mL上层液到另一试管，60-70℃水浴减压蒸馏，或者在60-70 ℃水浴氮气吹干；

（4） 加入2.0mL正己烷和0.5mL1×样品提取液，最大速度涡旋振荡2分钟溶解干燥物；

（5） 室温（22.5±2.5）°C下离心力4000g离心2分钟；

（6） 去除上层正己烷层，每孔取50 µL下清液进行测试。

稀释倍数：1.0

5） 奶粉

（1） 称取2g奶粉，加入10mL蒸馏水溶解，混合均匀；

（2） 室温（22.5±2.5）°C下离心力4000g离心5分钟，除去上层脂肪层；

（3） 从水相中取4mL下清液，加入6mL乙酸乙酯，最大速度涡旋振荡3分钟；

（4） 室温（22.5±2.5）°C下离心力4000g离心5分钟；

（5） 移取3mL上层溶液（相当于0.4g原始奶粉）到另一试管，60-70℃水浴减压蒸馏，或者在60-70 ℃水浴氮气吹干；

（6） 加入0.8mL1×样品提取液溶解干燥物；

（7） 每孔取50 µL上清液，进行样品测试。

稀释倍数：2.0

10．检测步骤

以下为计算份量的表格，用户可根据自己的需要来确定需要配置多少试剂。

（1） 加入50mL的标准液于所设定的孔中；

（2） 加入50mL的样品于所设定的孔中；

（3） 在每孔中加入50mL酶标二抗；

（4） 在每孔中加入50mL抗体， 轻敲微孔板边缘混匀30秒；

（5） 室温（22.5±2.5）°C避光孵育30分钟；

（6） 洗板4次，每次加入250mL 1×洗液，最后一次尽量甩干并在吸水纸上吸干；

（7） 每孔加入100mL的TMB底物，用手敲板边缘1分钟混合均匀；

（8） 室温（22.5±2.5）°C避光孵育15分钟， 加入100mL的终止液终止反应；

（9） 在450nm下读OD值(读数前，用无绒布擦拭除去微孔底部的水分和指痕)。

11．结果计算

1. 以标准品的浓度和平均相对吸光值分对数为横纵坐标做对数标准曲线

2. 相对吸光值（%）=标准品（或样品）吸光值/零标准吸光值×100

3. 根据样品的平均吸光值分对数在标准曲线上确定对应的浓度（通用计算软件根据Log/Log 标曲看线性和结果）。

备注：如结果呈阳性反应，应该用其他检验方法（如色谱/质谱方法等）进行确证。

以下曲线图是氯霉素酶联免疫反应测试盒典型标准曲线

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