卡那霉素ELISA试剂盒

REAGEN卡那霉素ELISA试剂盒,灵敏度高，售前售后技术支持，技术人员可到场现场技术指导。

深圳容金科技有限公司是一家产学研相结合、科工贸一体化的，集临床、食品安全及动物防疫检验试剂的研发、生产、销售及技术服务为一体的大型生物高科技企业。公司目前有近 20余位博士、硕士、留学归国人员，技术力量雄厚。 公司自成立以来，不断加快科技创新和自主品牌建设步伐，打造企业核心竞争力，企业综合实力得到快速提升。目前已经建成生命科学研究中涉及的多个实验技术平台，如 RT-PCR、实时荧光定量 PCR、ELISA、Western Blot、SouthernBlot、Confocol、Flow Cytometry、HPLC、免疫组织化学、免疫荧光、测序、基因芯片等技术平台。同时公司重视营造以人为本的企业文化，着力构建和谐企业。凭着“以质量求生存，以服务求发展”的经营理念和“诚信服务”赢得了广大友人的厚爱，公司的产品不断推陈出新，产品结构也在不断地调整优化。作为一个朝气蓬勃，积极向上，富有活力的年轻企业，公司具备了良好的企业文化，创新的战略构想，强大的科研实力和的管理理念，公司已经发展成为规模大，品种齐全，现代多元化集团公司。我们公司力求与客户建立良好联系，并承诺在客户所服务的领域提供有力的支持和满意的售后服务。 随着我国经济不断的高速发展，公司正面临着良好的契机，我们感谢战斗在一线的临床及科研工作者，并诚挚的邀请您一起为美好的明天奋斗，共创辉煌！

EAGEN^™ 卡那霉素ELISA试剂盒

RND99033

1．概述

REAGEN^™ 卡那霉素ELISA试剂盒酶联免疫反应测试盒是用于肾脏、肝脏、肌肉（牛肉、鸡肉和猪肉）、细胞裂解液、血、尿、牛奶中卡那霉素残留的定量检测。该试剂盒有以下特点：

Ø 快速(10-40分钟)，多种样品的非有机溶剂的提取方法，高回收率(>80%)。

Ø 检测限0.2ng/g 。

Ø 高重复性。

Ø 快速的ELISA检测方法（不考虑样本量的前提下只需不到1小时）。

2.卡那霉素ELISA试剂盒原理

REAGEN^™ 卡那霉素酶联免疫反应测试盒基于竞争性酶联反应原理，抗原已经包被于微孔板上。分析时，样品、酶标物以及抗体加入孔中，如果样品中含有药物，会与微孔板上的抗原竞争抗体，同时酶标物与抗体结合。加入TMB底物，底物的颜色显色强度与样品中毒素的含量成反比。

3.卡那霉素ELISA试剂盒组成

已包被抗原的酶标板(Kanamycin-coated Plate)（可拆式） 1×96孔

标准液(Standards)（0，0.2，0.6，1.8，5.4，16.2ppb） 6×1.0mL

高标液1000ppb（Spiking） 1×1.0mL

一抗(Antibody #1) 1×6.0mL

HRP酶标二抗(HRP-Conjugated Ab#2) 1×6.0mL

10×样品稀释液（10×Sample Diluent） 1×15mL

20×浓缩洗液(Wash Solution) 1×28mL

TMB底物(TMB Substrate) 1×12mL

终止液(Stop Buffer) 1×12mL

10×样品提取液(10×Sample Ext. Buffer)（可选） 1×15mL

样品平衡液（Sample Balance buffer）（可选） 1×2.0mL

本试剂盒应当在2-8℃的温度下储存，有效期为一年。如果超过1个月不使用试剂盒，请

将标品、一抗和二抗放置-20℃或者冰冻保存。

4.检测定量限

5.交叉反应

6.未提供的设备或材料

1) 酶标仪

2) 组织匀浆器

3) 漩涡振荡器

4) 移液器(10、20和100mL，1mL各一支)

5) 多道移液器（50-300mL）

7.注意事项

实验前请阅读以下文字，以保证获得最佳实验效果。

1) 标准品中含有卡那霉素，请小心使用。

2) 不要使用过期的试剂盒。

3) 不同批次的试剂盒不要混用，抗体和微孔板具有盒与批次的特异性。

4) 尽量保持室温20-25℃，避免在通风口操作防止温度过低，过热或者蒸发。同样的，不

要在阳光直射下实验，防止过热及蒸发。在孵育期间，如果工作台温度过低，应该铺垫若干纸巾或者其他物料。

5) 水质量很重要，确保使用蒸馏或者去离子水。

6) 加入样品或者试剂到空的微孔板时，吸嘴靠于微孔接近底部，并保持接触。

7) 孵育时间的计算越规范越好，保持添加标准品的一致性，先添加标准品后添加样品。

8) 从低浓度到高浓度地添加标准品，降低影响标准品曲线质量的风险。

9) 将微孔板置于放有干燥剂的密封袋中，冷藏保存。

8.样品的准备

确保样品的正确保存，一般来说，样品在2-4只能保存1-2天，如果要保存更长时间，就要保存在-20冷冻保存，在用之前需要将冷冻的样品在室温下或冰箱内解冻。

1) 准备1×样品稀释液:

1体积 10×样品稀释液加9体积蒸馏水稀释。

2) 准备1×样品提取液:

1体积10×样品提取液加9体积蒸馏水稀释。

细胞裂解液

（1） 取100mL细胞裂解液，加900mL 1×样品稀释液，混匀；

（2） 离心5分钟，4000×g；

（3） 每孔取50mL上清液来检测。

稀释倍数:10

鱼/虾肉/肝/肾

（1） 称取 1.0 g 匀浆样品，加 4mL的1×样品提取液；

（2） 涡流振荡1分钟；离心5分钟，4000×g；

（3） 取200mL上清液到干净的新管中，加入1.375mL 1×样品稀释液和25mL样品平衡液，涡流混匀30秒。

（4） 每孔取50mL上清液来检测。

稀释倍数：40

血清/尿

（1） 取50mL样品，加1.2mL 1×样品稀释液，混匀；

（2） 离心5分钟，4000×g；

（3） 每孔取50mL上清液来检测。

稀释倍数：25

鲜奶

（1） 取100mL鲜奶到一干净离心管，加900mL 1×样品稀释液；

（2） 漩涡震荡30秒；

（3） 在4,000 x g离心10分钟；

（4） 每孔取50mL上清液来检测。

稀释倍数：10

9.检测步骤

注意：试剂在使用之前要在室温下解冻1-2小时，确定在使用前阅读过注意事项。准备适量的检测用试剂，所有的试剂摇匀后使用。准备足够所有小管所需的用量，不能将试剂倒回原来的瓶子中，处理试剂时建议用废弃的瓶子以降低污染的风险。

1) 1x洗液的制备

1体积的20x洗液同19体积的蒸馏水混合。

检测

以下为计算份量的表格，用户可根据自己的需要来确定需要配置多少试剂。

（1） 加入50mL的标准品于所设定的孔中；

（2） 加入50mL的样品于所设定的孔中；

（3） 按顺序在每孔中加入50mL HRP酶标二抗和50mL一抗，轻敲微孔板边缘混匀30秒；

（4） 室温（22.5±2.5）°C避光孵育30分钟；

（5） 洗板4次，每次应该加入250mL 1×洗液，最后一次使板尽量甩干并在吸水纸上拍干；

（6） 加入100mL的TMB底物；计时，轻敲微孔板边缘混匀30秒；

（7） 在室温（22.5±2.5）°C避光孵育15分钟，加入100mL的终止液终止反应；

（8） 在450nm下读OD值 (读数前，最好用无绒布擦拭除去微孔底部的水分和指痕)。

10.结果计算

1. 以标准品的浓度和平均相对吸光值分对数为横纵坐标做对数标准曲线

2. 相对吸光值（%）=标准品（或样品）吸光值/零标准吸光值×100

3. 根据样品的平均吸光值分对数在标准曲线上确定对应的浓度（通用计算软件根据Log/Log 标曲看线性和结果）。

以下曲线图是卡那霉素酶联免疫反应测试盒典型标准曲线

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