96T 庆大霉素ELISA试剂盒

REAGEN庆大霉素ELISA试剂盒,灵敏度高，用于检测庆大霉素含量。售前售后技术支持，技术人员可到场现场技术指导。

深圳容金科技有限公司是一家产学研相结合、科工贸一体化的，集临床、食品安全及动物防疫检验试剂的研发、生产、销售及技术服务为一体的大型生物高科技企业。公司目前有近 20余位博士、硕士、留学归国人员，技术力量雄厚。 公司自成立以来，不断加快科技创新和自主品牌建设步伐，打造企业核心竞争力，企业综合实力得到快速提升。目前已经建成生命科学研究中涉及的多个实验技术平台，如 RT-PCR、实时荧光定量 PCR、ELISA、Western Blot、SouthernBlot、Confocol、Flow Cytometry、HPLC、免疫组织化学、免疫荧光、测序、基因芯片等技术平台。同时公司重视营造以人为本的企业文化，着力构建和谐企业。凭着“以质量求生存，以服务求发展”的经营理念和“诚信服务”赢得了广大友人的厚爱，公司的产品不断推陈出新，产品结构也在不断地调整优化。作为一个朝气蓬勃，积极向上，富有活力的年轻企业，公司具备了良好的企业文化，创新的战略构想，强大的科研实力和的管理理念，公司已经发展成为规模大，品种齐全，现代多元化集团公司。我们公司力求与客户建立良好联系，并承诺在客户所服务的领域提供有力的支持和满意的售后服务。 随着我国经济不断的高速发展，公司正面临着良好的契机，我们感谢战斗在一线的临床及科研工作者，并诚挚的邀请您一起为美好的明天奋斗，共创辉煌！

REAGEN^™庆大霉素庆大霉素ELISA酶联免疫反应测试盒是用于鸡蛋、蜂蜜、饲料、组织（猪肝/猪肉/鸡肉/鱼）、尿液、血清、牛奶和奶粉等中庆大霉素残留的定量检测。其特点包括：

Ø 高回收率,快速，低成本提取方法。

Ø 检测限0.02ng/g

Ø 高重复性。

Ø 快速的ELISA检测方法（在不考虑样品数量下只需不到1小时）。

2．庆大霉素ELISA试剂盒原理

REAGEN^™庆大霉素酶联免疫反应测试盒基于竞争性酶联反应原理，相关的抗原已经包被于微孔板上。药物分析时，样品同酶标二抗以及特异性一抗共同被添加到板孔中。如果样品中含有药物，会竞争一抗，抑制抗体与板上包被的药物抗原结合，同时酶标二抗与一抗结合，形成包被抗原-抗体-酶标二抗复合物。加入底物后，产物的颜色强弱与样品中药物的浓度成反比。

3.试剂盒组成

试剂盒组成	规格	保存条件
微孔板(Gentamicin-coated Plate)	96孔板（12×8 孔）	2-8℃
庆大霉素标准品(Standards)： 阴性质控(Negative control) 0.02ng/mL 0.06ng/mL 0.2ng/mL 0.6ng/mL 1.5ng/mL 回收用50 ng/mL（Spiking）	1×1.0mL 1×1.0mL 1×1.0mL 1×1.0mL 1×1.0mL 1×1.0mL 1.0mL（可选）	2-8℃
庆大霉素一抗(Gentamicin Antibody #1)	1×6mL	2-8℃
酶标二抗(HRP-Conjugated Antibody #2)	1×6mL
10×样品提取液(Sample Extraction Buffer)	1×30mL
10×样品稀释液(Sample Dilution Buffer）	1×30mL
20×浓缩洗液(Wash Solution)	1×30mL
终止液(Stop Buffer)	1×12mL
TMB底物(TMB Substrate)	1×12mL
10X 庆大霉素提取液 10X Gentamicin Extraction Buffer	1×30mL	2-8℃
庆大霉素平衡液  Gentamicin Balance Buffer	1×3mL	2-8℃

本庆大霉素ELISA试剂盒应当在2-8℃的温度下储存，有效期为一年。如果1个月内不使用试剂盒，

一抗和酶标二抗应置于-20℃或者冷冻保藏。

4.检测定量限

检测物质	定量限（ng/g）
鸡蛋	0.2
蜂蜜	0.2
饲料	0.5
组织（猪肝/猪肉/鸡肉/鱼）	0.2
牛奶	0.02
奶粉	0.2
尿液/血清	0.4

5.交叉反应

6．未提供的设备或材料

1) 酶标仪(450nm)

2) 恒温培养箱

3) 匀质器

4) PH测试条

5) 漩涡振荡器

6) 微量加样器(10、20、100和1000mL各一支)

7) 蒸馏水

8) 多道枪：50-300mL

9) 离心机

 

7.注意事项

实验前请阅读以下文字，以保证获得最佳实验效果。

1) 标准品中含有庆大霉素，请小心使用。

2) 不要使用过期的试剂盒。

3) 不同批次的试剂盒不要混用，抗体和微孔板具有盒与批次的特异性。

4) 尽量保持室温20-25℃，避免在通风口操作防止温度过低，过热和/或者蒸发。同样的，不要在阳光直射下实验，防止过热及蒸发。在孵育期间，如果工作台温度过低，应该铺垫若干纸巾或者其他物料。

5) 水质量很重要，确保使用蒸馏或者去离子水。

6) 加入样品或者试剂到空的微孔板时，吸嘴靠于微孔接近底部，并保持接触。

7) 孵育时间的计算越规范越好，保持添加标准品的一致性，先添加标准品后添加样品。

8) 从低浓度到高浓度地添加标准品，降低影响标准品曲线质量的风险。

9) 将微孔板置于放有干燥剂的密封袋中，冷藏保存。

 

8．样品的准备

所有的试剂在使用之前应将其回温至室温，并在使用试剂前摇动几下，以保证合理的浓度。

（1）1×样品提取液

按1：9的比例配制10x样品提取液和蒸馏水。

（2）1×样本稀释液

按1：9的比例配制10×样本稀释液和蒸馏水

（3）1×庆大霉素提取液

按1：9的比例配制10×庆大霉素提取液和蒸馏水

 

1） 鸡蛋

（1）取1g匀质样品（蛋清，蛋黄或者两者均可），加入4mL 1×样品提取液，最大速度漩涡振荡5分钟；

（2）4000转/分钟离心10分钟；

（3）取200μL上清液，加入到200μL 1×样品稀释液中，涡旋混匀；

（4）每孔取50μL样品进行检测。

稀释倍数：10

 

2） 蜂蜜

（1）取1g蜂蜜样本，加入4mL 1×样品提取液，最大速度漩涡振荡5分钟；

（2）取200μL混合液，加入到200μL 1×样品稀释液中，涡旋混匀；

（3）每孔取50μL样品进行检测。

稀释倍数：10

 

3） 饲料

（1）使用合适的匀浆器匀质样品；

（2）称取1g样品，加入5mL1x庆大霉素提取液；振荡20分钟；

（3）4000转/分钟离心5分钟；

（4）取200μL上清液（如果不够澄清，使用Whatman1号滤纸过滤），加入775μL 1×样品稀释液；

（5）加入25μL 庆大霉素平衡液，涡旋混匀；

（6）每孔取50μL样品进行检测。

     稀释倍数：25

 

3） 组织（猪肝/猪肉/鸡肉/鱼）

（1）除去组织中的脂肪，匀浆器匀质样品；

（2）称取1g匀质样品，加入4mL 1x庆大霉素提取液，震荡5分钟；

（3）4000转/分钟离心5分钟；

（4）取200μL上清液（如果不够澄清，使用Whatman1号滤纸过滤），加入180μL1×样品

           提取液；

（5）加入20μL 庆大霉素平衡液，涡旋混匀；

（6）每孔取50μL样品进行检测。

      稀释倍数：10

 

4） 牛奶

（1）对于无脂牛奶，直接取50μL样品进行检测；

（2）对于含脂牛奶，使用前需要以4000g离心5分钟，除去上层脂肪层，再取50µL样品进行检测。

稀释倍数：1

 

5）奶粉

（1）取1g样品，加入10mL蒸馏水，充分溶解样本；

（2）4000转/分钟离心5分钟；

（3）去掉上层脂肪层；

（4）每孔取50μL样品进行检测。

稀释倍数：10 

对于庆大霉素含量比较高的样本，可以用1×样本稀释液对样本进一步进行的稀释，稀释倍数也要做相应的改变。

 

6）尿液/血清

（1）取0.5mL样品，2000g离心5分钟；

（2）取上清液，用1×样品稀释液稀释（如：25µL样品加入475µL1×样品稀释液）

（3）每孔取50μL样品进行检测。

稀释倍数：20

 

9．检测步骤

    试剂准备：

注意：试剂在使用之前要在室温下解冻1-2小时，确定在使用前阅读过注意事项。准备适量的检测用试剂，所有的试剂摇匀后使用。准备足够所有小管所需的用量，不能将试剂倒回原来的瓶子中，处理试剂时建议用废弃的瓶子以降低污染的风险。

1x洗液的制备

1体积的20x洗液同19体积的蒸馏水混合。

检测：

以下为计算份量的表格，用户可根据自己的需要来确定需要配置多少试剂。

（1）加入50mL的标准液于所设定的孔中；

（2）加入50mL的样品于所设定的孔中；

（3）在每孔中加入50mL酶标二抗， 再加入50mL一抗，轻敲微孔板边缘混匀1分钟；

（4）室温（20-25℃）孵育30分钟；

（5）洗板4到5次，每次加入300mL 1×洗液，最后一次使板尽量甩干并在吸水纸上吸干；

（6）加入100mL的TMB底物，轻轻震板1分钟；

（7）在室温下避光孵育15分钟，加入100mL的终止液终止反应，在450nm下读OD值。

11．结果计算

1. 以标准品的浓度和平均相对吸光值分对数为横纵坐标做对数标准曲线

2. 相对吸光值（%）=标准品（或样品）吸光值/ 零标准吸光值×100

3. 根据样品的平均吸光值分对数在标准曲线上确定对应的浓度（通用计算软件根据Log/Log 标曲看线性和结果）。

以下曲线图是庆大霉素ELISA试剂盒酶联免疫反应测试盒的典型标准曲线

 

 

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