Takara Cellartis® 心肌细胞  Takara Cellartis® 人源心肌细胞 Y10075 Human Cardiomyocyte

Takara Cellartis® 人源心肌细胞来自人类诱导多能干细胞（iPS）的人类干细胞系。iPS细胞已分化为自发搏动的心肌细胞。随后这些细胞被分离成单细胞悬液并在小瓶中冷冻。心肌细胞是机体具有活力的细胞。它们是高度分化的高氧含量的细胞，拥有大量的线粒体。心肌细胞占有心脏重量的75%，但仅为心脏细胞数量的1/3。高度分化

 华雅再生医学旗舰公司：红荣微再（上海）生物工程技术有限公司为中国再生医学和生物工程技术领域的组织器官再生研究、组织器官功能重建研究、干细胞技术研究、组织工程生物支架材料研究、器官移植医疗器械产品等再生医学产业链的相关客户提供： iPS/ES胚胎干细胞的种子细胞、心肌细胞、MSC间充质干细胞、基底膜基质胶细胞支架、干细胞生长分化调控因子、功能胶原蛋白生物材料、器官模型3D打印技术材料、生物医学试剂耗材仪器等种类丰富的产品，以“Focus on Tissue and Organ Regeneration 专注组织器官再生与功能重建”为己任，我们与客户携手为中国再生医学产业的发展而前行。

Takara Cellartis® 人源心肌细胞 Y10075 Human Cardiomyocyte

【产品简介】

Takara Cellartis® 人源心肌细胞来自人类诱导多能干细胞（iPS）的人类干细胞系。iPS细胞已分化为自发搏动的心肌细胞。随后这些细胞被分离成单细胞悬液并在小瓶中冷冻。心肌细胞是机体具有活力的细胞。它们是高度分化的高氧含量的细胞，拥有大量的线粒体。心肌细胞占有心脏重量的75%，但仅为心脏细胞数量的1/3。高度分化的心肌细胞几乎没有增殖能力，它们在a-肾上腺素的刺激下通过Ras/MEK途径发生肥大生长。所有的心肌细胞都能自律性的将膜去化和复化。所有的心肌细胞收缩都是肌源性的，不受神经系统刺激。心肌细胞具有复杂的信号网络，从而调节其在心脏节律性的泵出功能中的作用。心力衰竭时，心肌细胞的肥大和凋亡导致心肌收缩功能的下降。更好地了解心脏信号系统有助于揭示心肌细胞死亡的细胞机制。

【产品订购】

产品货号	产品名称	规格	运输条件
Y10075	Takara Cellartis® 人源心肌细胞	1 Kit	常温25cm2培养瓶运输
Y10063	人源心肌细胞维持培养基	90ml	2-8°C
Y10062	人源心肌细胞解冻基	32ml	2-8°C

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【产品应用范围】

1.需要用到人源心肌细胞的研究项目： 1. 由于人类心脏电生理学特性，其心肌细胞的去化时程与啮齿类动物差异很大。由于缺失人类心肌系统，只能取用其他大型哺乳动物的原代分离心肌细胞替代。而这些细胞的来源都不稳定，实验结果的重复性也无法保证。基本没有可能获得并培养原代人源心肌细胞，以 Cellartis心肌细胞为代表的ES/hiPS-心肌细胞，是目前较的人源心肌细胞来源。人源心肌细胞的很多核心功能蛋白与小鼠等模式动物不同。例如，小鼠心肌细胞主要表达α重链肌球蛋白，以适应高频率的搏动，而人源心肌细胞主要表达β重链肌球蛋白，适应低频率的搏动。此外，以Ito 和Ik为代表的钾离子通道在不同种属动物及人源心肌细胞间的表达和功能差异大。

需要频繁用到体外培养人源心肌细胞的研究项目： 大多数心脏研究的对象为心肌细胞, 当对研究对象的要求为单一纯化的心肌细胞时, Takara Cellartis心肌细胞是理想的选择.传统研究采用的心肌细胞, 存在: 分离技术复杂繁琐、缺少有效的纯化方法、体外培养困难等缺陷。尤其是对于心脏生理接近人类的大型哺乳动物而言，分离动物心肌细胞成本其高昂，而获取的心肌细胞活性也更低。因此，Takara Cellartis心肌细胞是此类研究的理想的选择。

需要用到长期心肌细胞模型的研究项目： 由于传统原代心肌细胞在培养中存活时间短（成年动物仅有数小时，新生动物不超过1周），大多数耗时较长的心脏生理和病理学研究难以采用心肌细胞开展，而Takara Cellartis人源心肌细胞的解决了这一问题，Takara Cellartis人源心肌细胞可以方便的在体外进行稳定培养，时间上可满足任何长期实验的需要。

Takara Cellartis系列产品在药物开发方面的主要应用： 作为一种标准化的人源细胞产品，Takara Cellartis人源心肌细胞可以大的促进药物研发、提高药物效果评价和药物毒性测试。从而在占大多数的疗效低下和具有潜在毒性的化合物进入成本高昂的阶段前，将它们排除出去。

三、Takara Cellartis人源心肌细胞常见的应用： 1. 基本细胞学实验： 1.1. 细胞活力测定 1.2. 凋亡测定 1.3. ATP酶活性测定 1.4. 氧化应激测定 1.5. 线粒体活性测定 2. 电生理学实验： 2.1. 传统膜片钳记录 2.2. 微电阵列

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【产品特征】

人源细胞	人心肌细胞与常用实验动物的心肌细胞相比，存在较大生理学差异。例如，人心脏生理条件下每分钟搏动60-90次，而小鼠为500-700次，大鼠为300-400次。心肌细胞从hiPSC诱导分化而成，具备动物细胞无法比拟的优点。
纯度高	心肌细胞纯度达99%以上，可由搏动和表达GFP的细胞比例证实。
均一性好	可以提供大量组成稳定的心肌细胞群体，产品经过严格的质检，保证后续实验良好的重复性。
完全的心肌生理学活性	Takara Cellartis人源心肌细胞具备大多数正常人类心脏中心肌细胞的标准电生理学和生物化学特性，可以受到电兴奋刺激而产生搏动，不同心肌细胞直接还可以传导电兴奋信号。可以用于多种生物化学和电生理学检测。
培养简易	Takara Cellartis人源心肌细胞产品以冻存细胞的形式运输和保存，并提供配套的接种培养基和维持培养基。仅需常规细胞培养设施即可操作应用。
稳定性强 可长期培养	可以被长期体外培养。在理想条件下，可维持存活达到3个月以上，并且保持节律性的搏动，是长期药物毒性实验和生理学研究的理想模型工具。

【细胞培养】

一、cellartis人源心肌细胞培养

cellartis心肌细胞解冻， 使用人源心肌细胞解冻基（Y10062）解冻后的第二天

人源心肌细胞可用于解冻后第三天开始（一次介质改变后2天）。介质应改为2或3次/天。心肌细胞可在培养基中维持推荐条件下解冻后至少14天。流程图如图1所示。

图1 心肌细胞的cellartis工作流

二、细胞培养容器的涂层

1.稀释要求：杜贝尔科磷酸盐缓冲盐水+纤连蛋白量（终浓度50µg/ml）。

2.加纤连蛋白溶液的细胞培养容器（0.3ml/cm²，对应15µg/cm²）,确保整个表面被覆盖。

3.培养条件：37°C ± 1°C and 5% CO₂ for >3 hr

4.在使用前从细胞培养容器中取出纤连蛋白溶液。

三、Cellartis CM介质的制备

1.解冻Cellartis 解冻基

2.净化所有的瓶子和一个合适的消毒剂和地点的外表面为生物安全柜。

3.加入8mlFBS每32毫升Cellartis CM解冻库,完成Cellartis CM的解冻液。

4.Cellartis解冻介质应存放在4°C

5.丢弃变质的Cellartis CM解冻液。

四、Cellartis CM培养基

1.解冻Cellartis CM的培养基。

2.净化中适当补充瓶的外表面消毒剂放入生物安全柜。

3.加入10mlFBS/90mlCellartis CM培养基，完成Cellartis CM培养基。

4.Cellartis CM 培养基保存在4°C

5.丢弃变质的Cellartis CM培养基。

五、Cellartis人源心肌细胞解冻

建议多两到三个小瓶解冻一次。推荐的播种密度是1.2 - 1.5×10⁵viable cells/cm2cript:void(0);">

•准备Cellartis CM解冻介质中加入适当体积后Y—27632至终浓度为10µM.温暖到室温（RT，15–25°C）。

•涂上适当数量的细胞培养容器

1.转运时，尽快将冷冻瓶中的液氮从37°C降至1°C水浴用钳。

2.轻轻地推动小瓶在水的表面下，解冻细胞，而不旋转小瓶。不要把小瓶的盖子浸入水浴中，因为这样会污染人源心肌细胞。

3.解冻完成后，将小瓶从水浴中取出（约3分钟，瓶外仍应冷）。

4.用适当的消毒剂擦拭小瓶，放入生物安全柜内。

5.用吸管轻轻地将细胞悬液转移到无菌的50ml试管中。

6.随着Cellartis CM的解冻液1 ml冲洗瓶（10µM Y-27632）和将它添加到滴细胞悬液。

7.添加Cellartis CM解冻液8ml（10µM Y-27632）。

8.离心管在200g时离心为5分钟，去除上清液。

9.悬浮细胞球Cellartis CM的解冻液（10µM Y-27632），

10.计数细胞并测量存活率。

11.添加Cellartis CM的解冻液（10µM Y-27632）所需的细胞密度和种子

细胞，使用0.4 - 0.6ml/cm²,确保整个表面覆盖介质。

12。将细胞培养单位转移到培养箱37°C ± 1°C >湿度90%,24小时。

注：人源心肌细胞可在解冻后第三天开始使用（一次培养后2天）

【其他所需材料】

The following materials are required but not supplied:

• Fetal Bovine Serum (FBS) (Life Technologies, Cat. No. 16140)

• Fibronectin (Sigma-Aldrich, Cat. No. F0895)

• PBS Dulbecco's with Ca²⁺ & Mg²⁺ (D-PBS +/+)

• PBS Dulbecco's w/o Ca²⁺& Mg²⁺ (D-PBS –/–)*

• Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red*

• Y-27632

• Cell culture vessels, tissue culture treated polystyrene surface

• General cell culture equipment used in cell culture laboratory

* only needed if dissociating Cellartis Cardiomyocytes, see section

【关键点】

cript:void(0);">1.轻轻抽吸介质的整个体积的培养容器和丢弃。

2.将人源心肌细胞添加到Cellartis CM的培养基中，0.4–0.6ml/cm²。

3.将细胞培养容器返回37°C ± 1°C >湿度90%的培养箱。

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【问与答】

1. 人心肌细胞是否可以增殖？

答：人心肌细胞是终末分化的功能细胞，与人体内的心肌细胞性质相同，不能增殖扩增。

2. 人心肌细胞所含的细胞亚类有哪些？

答：通过 MLC2v、MLC2a 和 HCN4 蛋白的免疫荧光检测，表明心肌细胞中含有 80 ~ 90%的心室肌样

细胞、10 ~ 15%的心房肌细胞和<3%的窦房结样细胞。

3. 人心肌细胞是否可以用自己配置的培养基？

答：HY StemCell 心肌细胞配套有心肌接种培养基、心肌维持培养基和 人心肌纯化试剂盒，心肌系列培

养基可维持心肌细胞在体外长期性状稳定、并保持高纯度。

3. 心肌细胞如何形成单层组织？

答：心肌细胞传导动作电位需要细胞间形成连接，按照合适的密度接种人心肌细胞，可以形成均一的同步化跳动的单层心肌组织。请参考说明书并结合实际经验，摸索出合适的接种密度。

5. 接种后心肌细胞没有跳动怎么办？

答：人心肌细胞一般在接种后 2 ~ 3天开始跳动，不超过5天。换液、传代和在培养箱外长期放置等导致细胞外环境变化的操作，会使心肌细胞停止跳动。

6.人心肌细胞可以在体外稳定维持多长时间？

答：人心肌细胞能在3个月内维持基因表达的稳定性，6 个月内维持特征与功能的完整性。考虑到非心肌细胞的增殖，2个月以上的研究项目需要每 6 -8周用 人心肌纯化完全培养基进行一次纯化处理。

7.心肌细胞停止搏动或搏动缓慢？

答：1）心肌细胞在再接种操作后，需要 1 ~ 3 天才能恢复搏动；2）心肌细胞在换液操作后、或在培养箱外放置过久，会减缓搏动或停止搏动，需要 2 ~ 3h 才能恢复正常搏动；3）心肌细胞长时间在人心肌纯化完全培养基中培养，搏动会减缓，需及时停止纯化，在心肌维持培养基中恢复 4 天以上，才能再次纯化。

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参考产品：

CDI scientists have used iPS cell technology to develop iCell® Cardiomyocytes. These human heart cells recapitulate apparently healthy human cardiac biology and overcome the limitations of existing heart cell models, offering these benefits:

1.95% pure population of ventricular, atrial, and nodal cells

2.Clinically relevant cardiac disease phenotypes

3.Relevant clinical targets for cardiovascular disease

4.Highly reproducible across a wide range of applications

CardioEasy®人心肌细胞是一种即用型的高纯度心肌产品。采用赛贝生物（Cellapy®）的心肌定向分化和纯化方法产生。同时，包括hiPS细胞在内的所有细胞培养分化过程采用化学成分确定的培养试剂。

本页产品地址：http://www.geilan.com/sell/show-6985404.html