RB3050/R30050 单细胞全基因组扩增试剂盒（RB3050/R30050）

美国Rubicon Genomics---单细胞全基因组扩增试剂盒1. 二代测序建库试剂（微量起始样品 50pg - 50ng）2. 单细胞扩增和单细胞测序建库试剂（广泛应用于生殖领域，是该领域的金标准。）3. 全RNA扩增试剂 （微量起始样品，可以低至10个细胞的总RNA）

 华雅再生医学旗舰公司：红荣微再（上海）生物工程技术有限公司为中国再生医学和生物工程技术领域的组织器官再生研究、组织器官功能重建研究、干细胞技术研究、组织工程生物支架材料研究、器官移植医疗器械产品等再生医学产业链的相关客户提供： iPS/ES胚胎干细胞的种子细胞、心肌细胞、MSC间充质干细胞、基底膜基质胶细胞支架、干细胞生长分化调控因子、功能胶原蛋白生物材料、器官模型3D打印技术材料、生物医学试剂耗材仪器等种类丰富的产品，以“Focus on Tissue and Organ Regeneration 专注组织器官再生与功能重建”为己任，我们与客户携手为中国再生医学产业的发展而前行。

微量DNA的金钥匙：单细胞全基因组扩增试剂盒 仅需2小时三步法可靠 Rubicon Genomics （RB3050/R30050） PicoPLEX® WGA Kit

【产品操作】

【产品】

1.可再生的单个细胞的结果(或< 15 pg DNA)

2.优越的再现性等位基因的表示

3.（RB3050/R30050） PicoPLEX® WGA Kit 单细胞全基因组扩增试剂盒易于使用和自动化

4.（RB3050/R30050） PicoPLEX® WGA Kit 单细胞全基因组扩增试剂盒在所有分辨率、微阵列和PCR上都有明确的结果

【产品应用】

研究领域

PicoPLEX® WGA Kit 单细胞全基因组扩增试剂盒的适用范围十分广泛，多种原始材料和微量样品均可通过该试剂盒进行单细胞全基因组扩增，

•生物标志物研究（CNVs、SNVs）

•体外受精胚胎植入前基因测序

•转基因动物基因分型

•胚胎和干细胞研究

•单精子分型 肿瘤

•体细胞遗传变异分析

•肿瘤进化和发展

•肿瘤干细胞

•循环肿瘤细胞 细菌

•宏基因组学研究

•微生物基因分型

Rubicon Genomics （RB3050/R30050） PicoPLEX® WGA Kit 单细胞全基因组扩增试剂盒可实现高度均一的全基因组扩增，其核心技术为多次退火环状循环扩增（MALBAC）技术，该技术利用独特的具有链置换活性的DNA聚合酶进行准线性的全基因组预扩增，通过PCR进行指数式扩增，为下游分析提供充分的实验材料。

Rubicon Genomics （RB3050/R30050） PicoPLEX® WGA Kit 单细胞全基因组扩增试剂盒解决了单细胞全基因组扩增的其中几个必要的矛盾：

1. 线性扩增。如果用全基因组PCR扩增，因为PCR的扩增偏向性，再加上PCR过程中较小的偏向性通过指数放大，其结果就会是严重的覆盖不均一，导致在许多地方只有很低的覆盖、甚至没有覆盖。所以，保证模板被线性地扩增，是要问题。

2. 全基因组覆盖。常规的建库方法，因为补平、加A、接头连接效率的问题，起始DNA中有很大一部分会被浪费，没有形成有效文库分子（也就是两头都接好引物的DNA片段）。在单细胞测序中，这是不可接受的。

3. 高扩增效率。单细胞中的每个基因位置理论上都只有2个拷贝，而要从2个拷贝扩增到足够建立文库的DNA量，要经过许多次的扩增。这就需要很高的扩增效率。而一般的线性扩增很难有好的扩增效率

我们的 PicoPLEX® WGA Kit 单细胞全基因组扩增试剂盒与MALBAC其技术原理一样，

MALBAC™技术（Multiple Annealing and Looping based Amplification Cycles），即多次退火环状循环扩增技术，为一种单细胞全基因组扩增技术，先利用独特的具有链置换活性的DNA聚合酶进行准线性的全基因组预扩增，再通过PCR技术进行指数式扩增，为下游分析提供充足的实验材料。

MALBAC™技术源于哈佛大学，其授权给亿康基因，是目前上的单细胞全基因组扩增技术，使用该技术的相关论文发表于科学期刊《Cell》、《Science》、《PNAS》等。使用该技术，科学家们完成了迄今覆盖度zui高的单精子基因图谱，次对人类单个卵细胞完成了测序。Science杂志评选单细胞测序技术为2013年具发展前景的六大科学项目之一，Nature Methods也将其选为Method of the Year 2013。

MALBAC技术：

1) MALBAC技术降低PCR扩增偏倚，使得单细胞中zui大90%以上的基因组能够被测序。

2) MALBAC技术使得检测单细胞中较小的DNA序列变异变得更容易，因此能够发现个别细胞之间的遗传差异。这样的差异可以帮助解释癌症恶化的机制，生殖细胞形成机制，甚至是个别神经元的差异机制。

3) 灵敏度高：单细胞、单染色体或0.5pg的基因组DNA即可进行扩增。

4) MALBAC技术扩增均匀性显著优于其它同类技术，低覆盖度测序数据即可进行CNV分析，用于染色体三体检测及染色体微缺失变异检测。

5) 扩增产物用途广泛：可用于二代测序、微阵列、qPCR、基因克隆等下游应用。

MALBAC™学术突破性进展：

1.在杂志发表文章：Science 、Cell 、PNAS、Annual Review等

2.严格验证MALBAC技术用于PGS的文章发表于ASRM（美国生殖医学学会）会刊

3.次完成人类单个卵细胞的测序

4.完成迄今覆盖度zui高的单精子基因图谱

5.个无创植入前染色体筛查宝宝诞生，相关成果发表于《PNAS》

A. 用5’端有27个统一序列，而3’端是8个随机序列的引物，作为扩增引物。用随机引物保证可以在模板链上的各处随机结合

B. 0℃淬火，再65℃等温扩增，得到一轮的复制的产物 a. n个扩增产物（在图中标成蓝色），这些扩增产物都有在5’端有一个统一的引物 b. 1个原来的模板（在图中标成黑色）

C. 用有前链移开功能的聚合酶（ϕ29聚合酶）来进行扩增，这种酶的特点是会把酶前行方向上的前链从原来的模板链上进行解链、移开。利用这种特点，可以让模板上的每个点在一轮反应中，都有机会得到n个拷贝

D.巧妙之处：

a. 0℃淬火，在延伸开始之前，就把n个引物杂交到模板上

b. ϕ29聚合酶可以把前面的链给推开，结合前面的淬火步骤，一次复制出n个扩增子 2. 第2轮起的m轮扩增

巧妙之处

a. 线性扩增

i. 其巧妙之处在于，每个循环的后，加了一步58℃退火。这一退火过程，让完整扩增产物的两端发生链内杂交。这样3’端的序列就不能与新的游离引物发生杂交，也就不会引发起始于3’端的扩增，也就是避免了“完整扩增产物”的自我指数扩增。

ii. 如果发生以8个随机碱基为引物3’末端的指数扩增，3’末端的碱基序列不一致性就会导致扩增效率的Bias，再经过指数放大，就会变成明显的扩增效率Bias。

iii. 现在，还是8个随机碱基的引物在模板上随机地找结合位点，所有位点的被扩增机会大致均等。

iv. 完整产物的数量是m * n2，也就是说，扩增产物与m成正比，而不是与m2成正比，更不是与2m成正比。也就是说扩增产物与扩增的次数成线性关系。这达成了单细胞测序所要求的：线性扩增。

b. 全基因组覆盖

i. 再次利用ϕ29聚合酶的前链移开功能，在一个模板上扩增出多个扩增子。这样从第1轮扩增开始，每个模板就会得到多个扩增子。再加上以后5轮的扩增中，原始模板都有机会再次被扩增出多个扩增子。这样本保证每个原始模板都产生n个扩增子。建库时被漏掉一些扩增子，还是能保证大多数的基因组区域可以被建成库

c. 高扩增效率

i. 在单细胞全基因扩增中，所得到的 “完整扩增产物”的个数是m * n2个。这个 “n2”，还是利用了ϕ29聚合酶的“前链移开功能“，保证了扩增有较高的效率。可以得到较多的扩增产物，以供下面的实验之用。

Rubicon Genomics （RB3050/R30050） PicoPLEX® WGA Kit 单细胞全基因组扩增试剂盒其原理：

PicoPLEX® WGA Kit 单细胞全基因组扩增试剂盒通过扩增产物的末端自封闭来抑制指数扩增。 ·

PicoPLEX® WGA Kit 单细胞全基因组扩增试剂盒通过数轮线性扩增得到大量的扩增产物

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【研究领域】

1. 外显子组富集

2. SureSelect® 富集

3. SeqCap® EZ 富集

4. 福尔马林固定石蜡包埋DNA测序

5. 胚胎植入前遗传学筛查(PGS）/种植前遗传学诊断（PGD）

6. DNA测序

7. RNA测序

8. 染色体免疫共沉淀测序

【产品详情】

产品名称	平台	应用程序	样本	样本量	技术
ThruPLEX®DNA-seq Kit	Illumina NGS	WGS, WES, 靶向测序， 染色体免疫共沉淀测序, 转录组测序	FFPE DNA, gDNA, cDNA, Cell-free DNA, ChIP DNA, amplicons	50 pg – 50 ng	高灵敏度基于连接的扩增
ThruPLEX®-FD Prep Kit	Illumina NGS	WGS, WES, 靶向测序，ctDNA分析	Cell-free DNA isolated from plasma	<1 ng – 30 ng	高灵敏度基于连接的扩增
PicoPLEX™ DNA-seq Kit	Illumina NGS	CNV, Aneuploidy	Eukaryotic Cells or gDNA	<6 pg – 60pg	准随机引物线性扩增
PicoPLEX™ WGA Kit	阵列， PCR	CNV, Aneuploidy	Eukaryotic Cells or gDNA	<6 pg – 60 pg DNA	准随机引物线性扩增
TransPLEX®C-WTA Kit	阵列， PCR	基因表达分析	RNA	10 – 300 ng RNA	准随机引物扩增

企业使命：我们的使命是用干细胞科学家和组织工程技术人员在再生医学工程技术领域的创新力量，实现人类组织器官的定制、再生、功能重建，终提升人类的健康生活品质。

企业理念：专注组织器官再生与功能重建Focus on Tissue and Organ Regeneration

营销公司简介：

华雅再生医学旗舰公司：红荣微再（上海）生物工程技术有限公司是专门负责营销的公司。

提供产品：华雅再生医学旗舰公司-红荣微再（上海）生物工程技术有限公司为再生医学和生物工程技术领域的组织器官再生研究、组织器官功能重建研究、干细胞技术研究、组织工程生物支架材料研究、器官移植医疗器械产品等再生医学产业链的相关客户提供：胚胎干细胞的种子细胞、心肌细胞、人源肝脏细胞、MSC间充质干细胞、基底膜基质胶细胞支架、干细胞生长分化调控因子、功能胶原蛋白生物材料、器官模型3D打印技术材料、神经干细胞培养基、STEM121抗体、BD科研P100、P800蛋白质组学采血管、BD PAXgene全血RNA样本收集管、BD公司CPT/PRP美容采血管、Streck Cell-Free DNA BCT游离DNA采血管、循环肿瘤细胞CTC及无创产前基因检测采血管、生物医学试剂耗材仪器等种类丰富的产品，以“Focus on Tissue and Organ Regeneration专注组织器官再生与功能重建”为己任，我们与客户携手为再生医学产业的发展而前行。

欢迎您致电 华雅再生医学旗舰公司：红荣微再（上海）生物工程技术有限公司 号：。华雅再生医学-客服

2017年1月，Rubicon Genomics，Inc.成为Takara Bio的一员，现在宝日医生物技术（北京）有限公司（Takara Bio北京分公司）开始在销售Rubicon公司开发的下一代测序试剂。Rubicon公司成立于2000年，公司总部位于美国密歇根州。Rubicon公司开发的产品主要基于“ThruPLEX®技术”和“PicoPLEX®技术”，可以微量DNA起始构建下一代测序文库。ThruPLEX®技术”可从血浆中的微量游离DNA构建高多样性文库，准确检测低丰度DNA变异，用途广泛。“PicoPLEX®技术”，可从单细胞等微量DNA起始构建高重复再现性文库，用于拷贝数变异分析和染色体异倍性分析。Rubicon产品丰富了Takara基于SMART®的下一代测序产品线，为科研工作者在基因组学、单细胞和临床应用研究等领域提供更多解决方案。代表产品之一为：Rubicon Genomics RB3050/R30050 PicoPLEX® WGA Kit 单细胞全基因组扩增试剂盒Whole Genome Amplification from Single Cells。

2016年年底，TAKARA宝日医生物技术（北京）有限公司的市场部部长与宝生物工程（大连）有限公司的销售部部长分别从北京和大连飞往上海，对华雅再生医学的旗舰营销公司：红荣微再（上海）生物工程技术有限公司进行了实地考察，双方深入地探讨了未来干细胞及再生医学市场发展的趋势和方向，在双方公司中长期发展战略上，志同道合地看好再生医学市场的发展前景，历史性的医疗革命是我们这代人肩负的伟大使命！

TAKARA公司日本总部是：“iPS干细胞之父”诺贝尔奖获得者的故乡，具有前沿的iPS干细胞技术实力，TAKARA公司旗下的Cellartis子公司，拥有超过40人的研发团队，拥有超过15年的人干细胞研究经验，建立并储存大量的人iPS和ES细胞系。TAKARA旗下的Stem Cells公司SC Proven系列：凭借20多年干细胞技术经验研发，包括干细胞研究用培养基、抗体等耗材，具有庞大的客户群(美国、欧洲、日本)。

2017年TAKARA宝生物日本总部又收购了：美国Rubicon Genomics单细胞测序文库构建的领导品牌，代表性产品之一为：Rubicon Genomics RB3050/R30050 PicoPLEX® WGA Kit 单细胞全基因组扩增试剂盒Whole Genome Amplification from Single Cells，ThruPLEX® Plasma-seq Kit，ThruPLEX® DNA-seq Kit，PicoPLEX® DNA-seq Kit，PicoPLEX® WGA Kit， TransPLEX® C-WTA Kit.

其中部分产品红荣微再常备现货，欢迎来电咨询。

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