NP-40裂解液使用方法

中文名称：NP-40裂解液
分    类：蛋白提取
规    格：100ml
保存条件：—20℃,12个月
用    途：裂解细胞提取总蛋白质,主要用于Western,免疫沉淀,免疫共沉淀等
注意事项：主要由NP-40、氯化钠、Tris组成,NP-40为常用的去污剂之一。含有一支1.5ml PMSF。

简介：
NP-40裂解液(NP-40 Lysis Buffer)是一种比较温和的细胞组织裂解液。NP-40裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP和co-IP等。主要成分为50 mM Tris(pH7.4)，150 mM NaCl，1% NP-40以及sodium pyrophosphate，β-glycerophosphate，sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂，可以有效抑制蛋白降解。用NP-40裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

使用方法：
A． 对于培养细胞样品：
取适当量的RIPA裂解液混匀，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的终浓度为1 mM。

B．对于贴壁细胞，
去除培养液用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。轻轻的摇晃约5-10 min。充分裂解后，10000-14000g离心10 min，取上清，即可进行后续操作。

C． 对于悬浮细胞：
离心收集细胞，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍.加入适量裂解液,用枪吹打把细胞吹散。用手指轻弹或旋涡震荡5-10 min以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装然后再裂解。充分裂解后，10000-14000 g离心10 min，取上清，即可进行后续操作。

D．对于组织样品：
1)  手术切除的组织块迅速置于预冷的生理盐水中，漂洗数次，以清洁表面的血迹，将组织称量后切成几个较小的组织块放入组织匀浆器中。
2)  取适当量的RIPA裂解液混匀，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的终浓度为1 mM。
3)  按组织净重（g）：裂解液(ml)=1：10的比例，加入相应体积的裂解液进行匀浆(如果裂解不充分可以适当添加多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品， 可以适当减少裂解液的用量) 。
4)  用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
5)  充分裂解后，10000-14000 g离心3- 5 min，取上清，即可进行后续作。

注意事项：
1)  抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。建议将样品分装成合适的量，然后冷冻干燥或直接以液体状态置-20℃中保存，不要反复冻融。
2)  需自备PMSF。建议在临用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的终浓度为1 mM。
3)  为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。