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细菌的培养方法及培养基的配置

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  • 更新日期:2019-07-31 16:38
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详细介绍
                                        细菌的培养方法及培养基的配置
    夏天的午后,下雷阵雨是常有的事。火红的太阳逼得天地之间气息奄奄,终于天庭也发怒了,他让雷公电母施展一下惊天神威。即刻,雷公电母操起武器,站在施法台上念咒施法。瞬间,天空乌云密布,黑沉沉的两朵乌云猛然碰撞,天空出现一道利剑般的闪电,好像要把天空劈成碎片。闪电过后,雷公闪亮登场,只一会儿工夫,天地马上变了样,电闪雷鸣,风雨交加。这会儿,太阳再怎么狂妄也招架不住了,只好灰溜溜地暂时躲到乌云背后去了。接下来介绍细菌的培养方法及培养基的配……
原理
在基因工程实验和分子生物学实验中,细菌是不可缺少的实验材料。质粒的保存、增殖和转化;基因文库的建立等都离不开细菌。特别是常用的大肠杆菌。
实验材料、试剂与主要仪器
(一) 实验材料
大肠杆菌
(二) 试剂
1、胰蛋白胨
2、酵母提取物
3、氯化钠
4、1mol/
5、琼脂粉
6、抗生素(氨苄青霉素、卡那霉素等)
(三)仪器
1、培养皿
2、带帽试管
3、涂布器
4、灭菌锅
5、无菌操作台(含酒精灯、接种环、灭菌牙签等)
6、恒温摇床
四、操作步骤
(一)LB培养基的配制
配制每升培养基,应在950m1去离子水中加入:
细菌培养用胰蛋白胨 10g
细菌培养用酵母提取物 5g
摇动容器直至溶质完全溶解,用1mol/L 调节pH位至7.0。加入去离子水至总体积为in2 (1.034×105Pa)高压下蒸气灭菌20min,即为LB液体培养基。
LB固体培养基是在其液体培养基的基础上另加琼脂粉15g/L。
(二)细菌的培养
(1)在液体培养基中培养
1、过夜培养
⑴取5ml液体培养基加入一只无菌的试管中。
⑵用接种环或灭菌牙签挑一个单菌落,接种于培养液中。
⑶盖好试管,在摇床上以60r/min速度,于37℃过夜培养。
2、大体积培养
⑴按1∶100的比例将过夜培养物加入到一无菌烧瓶中,烧瓶的体积应该是培养液体积的5倍以上。
⑵于37℃,约300r/min剧烈摇动培养。
(2)在固体培养基中培养 细菌在固体培养基上培养主要是为了获得单菌落和短期保存。
平板划线法分离单菌落
⑴采用无菌技术,用接种环将接种物从平板的一侧开始划线。
⑵重新消毒接种环,从一划线处将样品划线至平板的其余部分,重复划线直至覆盖整个平板。
⑶于37℃培养直至长出单菌落。

 
 
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