人载脂蛋白E试剂盒操作步骤和样品收集、处理及保存

人载脂蛋白E试剂盒 操 作 步 骤

1. 每孔分别加入已稀释的样品、标准品各100ul。
2. 将板置于37℃温育30分钟。
3. 甩尽板中液体，用应用洗涤液进行洗涤，每次停留30秒，在纸上拍干。重复操作5次。
4. 每孔加入酶标偶合液100ul。
5. 将板置于37℃温育30分钟。
6. 甩尽板中液体，用应用洗涤液进行洗涤，每次停留30秒，在纸上拍干。重复操作5次。
7. 每孔加底物A、底物B各50 ul，置37℃恒温箱反应15分钟。
8．每孔加终止液50ul，于450nm波长读O.D.值

人载脂蛋白E试剂盒   样品收集、处理及保存

细胞培养上清：适用于检测体外培养的细胞分泌性成份。用无菌管收集细胞上清液，以1000×g离心15分钟，收集上清。
细胞：用PBS反复洗涤细胞3次，调整细胞浓度达到104-106/ml 左右，通过反复冻融，使细胞破坏并放出细胞内成份，或者细胞超声粉碎，离心取上清液检测。
血清：在室温下，血液自然凝固，以1000×g离心15分钟，取上清待测。
血浆：应根据标本的要求选择EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合后静置10-20 分钟后，以1000×g离心15分钟，收集上清。
体液：包括胸腹水、脑脊液，分泌物等。使用不含热原和内毒素的离心管收集，以1000×g离心15分钟，收集上清。
组织标本：切取组织标本，称取重量0.5mg，加入500ul 的PBS，用手工或匀浆器，或超声破碎仪将标本匀浆，以2000-3000 rmp离心20 分钟，收集上清进行检测。
样品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
保存：如果样品不能立即检测，应将其分装，-70 ℃保存，避免反复冷冻。保存过程中如出现沉淀，应再次离心。血液标本尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。