非雄激素依赖型前列腺癌 细胞培养步骤及注意事项

细胞培养步骤：

培养条件

DMEM培养基(DMEM/F-12，GIBCO，货号12400024，添加NaHCO3 2.0g/L)，85%;马血清，10%;胎牛血清，5%。气相：空气，95%;二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

培养方法

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

传代次数 1:3~1:8传代;每2~3天换液1次。

注意事项：容器与反应器 可直接加热 (1)试管 主要用途：①常温或加热条件下，用作少量试剂的反应容器。②收集少量气体和气体的验纯。③盛放少量药品。使用方法及注意事项：①可直接加热，用试管夹夹住距试管口处。②试管的规格有大有小。不加热时，试管内盛放的液体不超过容积的 ，加热时不超过 。③加热前外壁应无水滴;加热后不能骤冷，以防止试管破裂。④加热时，试管口不应对着任何人。给固体加热时，试管要横放，管口略向下倾斜。⑤不能用试管加热熔融NaOH等强碱性物质。 (2)蒸发皿 主要用途：①溶液的蒸发、浓缩、结晶。 ②干燥固体物质。 使用方法及注意事项：①盛液量不超过容积的 。 ②可直接加热，受热后不能骤冷。 ③应使用坩埚钳取放蒸发皿。 (3)坩埚 主要用途：用于固体物质的高温灼烧。 使用方法及注意事项： ①把坩埚放在三脚架上的泥三角上直接加热。 ②取放坩埚时应用坩埚钳。 ③加热后可放在干燥器中或石棉网上冷却。 ④应根据加热物质的性质不同，选用不同材料的坩埚。