人白三烯B4(LTB4) ELISA试剂盒操纵步骤的留意要点

人白三烯B4(LTB4) ELISA试剂盒操纵步骤的留意要点
1.包被抗原的选择包被抗原可分为天然蛋白、重组蛋白和小分子抗原三大类。天然蛋白需经纯化才能用直接吸附法包被，对于含杂质较多的抗原可以采用间接捕获法包被（先用能够与目的抗原反应的物质如抗体直接吸附在酶标板上，再通过特异性反应使抗原固相化）。经纯化的重组蛋白一般皆可直接包板。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有机化合物，由于分子量太小，往往难于直接吸附在酶标板上，一般都先使其与无关蛋白质如BSA等偶联，偶联物吸附于固相载体上。
2.包被液的选择一般常用的是pH9.6的碳酸盐缓冲液，如果包被的抗原在碱性条件下不稳定的话，也可以使用pH7.2的磷酸盐缓冲液。
3.包被温度的选择通常是4-8度条件下过*或者37度保温2小时，我们强烈建议4-8度条件下包被，有利于蛋白活性的保持。
试验操作中影响结果的原因及解决办法
1. 选择试剂
选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
2 加样
可能原因： ① 血清或血浆标本分离不好即进行加样; ② 手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时); ③ 加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。解决办法： ① 标本为血清：将血液先自然存放1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟;若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于-20℃的低温冰箱内。 ② 加样后及时放入孵箱。 ③ 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。④ 如果采用AT或其他全自动加样，选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。 ⑤ 标本较多时，请分批操作。
3. 孵育
可能原因： ① 孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗彻底; ② 孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗彻底。解决办法：① 贴封片或加盖; ② 按说明步骤严格控制操作时间。
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