1. 将未受损伤的组织切剖成小样本,约lcmXIcmX0.4cm。
2.将标本放在卡片的一端。标记该卡片,将带有标本的一端浸入液氮中。60s后,取出标本并放在干冰上。修剪卡片,使其大小刚好比组织块稍大些,转入预冷的(-70℃)带有标记的小瓶中。
3. 切片前,用1%明胶包被洁净的载玻片。加热至50℃使明胶溶于水中,冷却,加入0.02%叠氮钠。将玻片浸入明胶溶液中30s,取出,自然干燥。
4. 按照仪器使用说明书,用低温恒温器制备冷冻切片。通常切片厚度在5-10gm之间。用包被过的载玻片收集切片。
5. 让切片自然干燥。浸入新鲜配制的4%多聚甲醛中2min。
6. 用PBS洗数次,放入含1%NP-40的PBS中5rain。用PBS洗数次。
7. 将带有组织切片的载玻片放在湿盒中。加合适稀释度的一抗,用含蛋白质的溶液如3%BSA/PBS稀释抗体。
单克隆抗体选用杂交瘤细胞培养上清(特异性抗体浓度为20-50gg/m1)。小鼠腹水、纯化的单克隆抗体和多克隆抗体,以及粗制的多克隆抗血清应该测试其稀释度,以使特异性抗体的浓度在0.1~10ug/m1之间。如果特异性抗体的浓度是未知的,则制备并测试初始制品的不同稀释度(1:10,1:100,1:1000和1:10 000)。
8. 将玻片置湿盒中于室温下孵育至少60min。对于某些反应来说,孵育时间可延长至24h,以增加其敏感性。
9. 用PBS洗3次,每次5min以上。
10.加辣根过氧化物酶标记的二抗(特异性针对一抗)。这些试剂可以购自不同的经销商。如果二抗的确切用量是未知的,测试1:50—1:1000稀释的二抗。用含蛋白质的PBS稀释,如3%BSA/PBS。
11. 将样本置湿盒中,于室温下孵育30min。
12. 用PBS洗3次,每次5min以上。
13. 配制DAB/金属盐试剂。将6mg DAB溶于9ml 0.05mol/L Tris缓冲液(pH7.6)中。加lm[0.3%(W/V)氯化镍贮存液(可用相同浓度的氯化钴代替)。加0.1ml 3%过氧化氢。如果出现沉淀,用Whatman 1#滤纸(或相似品)过滤。
14. 将上述溶液加到标本中。在低倍光学显微镜下观察。当形成足够的棕/黑色沉淀时,用水冲洗以终止反应。通常这一反应过程约需1-20min。
15. 加数滴Harris苏木精。孵育约5min。时间长短取决于染色的强度。
16. 用水轻柔冲洗。
17. 通过各级乙醇使标本依次脱水。在75%乙醇中孵育两次,每次3min,95%乙醇中2次,每次3min,100%乙醇中2次,每次3min。自然干燥。
18. 加一小滴DPX至标本上。小心在其上面放一盖玻片(1#) 避免产生气泡。用纸巾去除多余的液体。DPX很快可以凝固,样品便可观察并照相。
早期生长反应因子1(EGR1)ELISA试剂盒 ,英文名: EGR1 ELISA Kit
早期前列腺癌抗原2(EPCA2)ELISA试剂盒 ,英文名: EPCA2 ELISA Kit
早期活化抗原CD69(CD69)ELISA试剂盒 ,英文名: CD69 ELISA Kit
早老素2(PS-2)ELISA试剂盒 ,英文名: PS-2 ELISA Kit
早老素1(PS-1)ELISA试剂盒 ,英文名: PS-1 ELISA Kit
再生胰岛衍生1α/胰石蛋白/胰线蛋白(REG1A)ELISA试剂盒 ,英文名: REG1A ELISA Kit
再生基因蛋白IV(REG-4)ELISA试剂盒 ,英文名: REG-4 ELISA Kit
载脂蛋白L1(APOL1)ELISA试剂盒 ,英文名: APOL1 ELISA Kit
载脂蛋白H(Apo-H)ELISA试剂盒 ,英文名: Apo-H ELISA Kit
载脂蛋白E(Apo-E)ELISA试剂盒 ,英文名: Apo-E ELISA Kit
载脂蛋白C3(Apo-C3)ELISA试剂盒 ,英文名: Apo-C3 ELISA Kit
载脂蛋白C3(Apo C3)ELISA试剂盒 ,英文名: Apo C3 ELISA Kit
载脂蛋白C2(Apo-C2)ELISA试剂盒 ,英文名: Apo-C2 ELISA Kit
载脂蛋白C1(APO-C1)ELISA试剂盒 ,英文名: APO-C1 ELISA Kit
载脂蛋白B48(apo-B48)ELISA试剂盒 ,英文名: apo-B48 ELISA Kit
载脂蛋白B100(apo-B100)ELISA试剂盒 ,英文名: apo-B100 ELISA Kit
载脂蛋白A5(apo-A5)ELISA试剂盒 ,英文名: apo-A5 ELISA Kit
载脂蛋白A4(Apo-A4)ELISA试剂盒 ,英文名: Apo-A4 ELISA Kit
载脂蛋白A2(apo-A2)ELISA试剂盒 ,英文名: apo-A2 ELISA Kit
载脂蛋白A1(apo-A1)ELISA试剂盒 ,英文名: apo-A1 ELISA Kit
载脂蛋白A1(apo A1)ELISA试剂盒 ,英文名: apo A1 ELISA Kit
运甲状腺素蛋白/前白蛋白(TTR)ELISA试剂盒 ,英文名: TTR ELISA Kit
孕烯醇酮(PREG)ELISA试剂盒 ,英文名: PREG ELISA Kit
孕酮受体(PGR)ELISA试剂盒 ,英文名: PGR ELISA Kit
孕酮和adipoQ受体家族成员Ⅶ(PAQR7)ELISA试剂盒 ,英文名: PAQR7 ELISA Kit
孕酮(PROG)ELISA试剂盒 ,英文名: PROG ELISA Kit
孕激素诱导阻断因子(PIBF)ELISA试剂盒 ,英文名: PIBF ELISA Kit
孕激素/孕酮(PROG)ELISA试剂盒 ,英文名: PROG ELISA Kit
远端上游元件结合蛋白1(FUBP1)ELISA试剂盒 ,英文名: FUBP1 ELISA Kit
原纤维蛋白-1(FBN1)ELISA试剂盒 ,英文名: FBN1 ELISA Kit
原钙黏素1(PCDH1)ELISA试剂盒 ,英文名: PCDH1 ELISA Kit






