DAPI
Cat number：KFS149
Store at 4℃
For Research Use o
一、 产品描述
DAPI 是一种蓝色核酸染料，优先染 dsDNA，DAPI 表现为可集中结合在 DNA 双链的 AT 小沟，结合后的 DAPI 荧光会发生 20 倍增强。同时，DAPI 也可以结合 RNA，与 DNA 不同，一般认为 DAPI 结合于 RNA 的 AU 区。DAPI/RNA 的复合体（500nm）有比 DAPI/dsDNA复合体（460nm）更长的荧光波长。DAPI 是一种常用的多色荧光技术中的核复染剂。他的蓝色荧光可以与绿色、红色、橙黄色探针形成鲜明对比。
二、 产品组份
|
组份 |
KFS149 |
储存条件 |
|
DAPI |
1 mg |
4℃，避光 |
三、 操作说明
荧光显微镜贴壁细胞复染
样品准备：根据需要固定样本。DAPI 染色通常与其他染色步骤同时操作。注意：固定与促渗不是所有做复染的样本都必须要做。
1.1 Equilibrate the sample briefly with phosphate-buffered saline (PBS).PBS 简单平衡样本。
1.2 1mL 去离子水溶解 5mg DAPI 可以得到 14.3mM 的 DAPI 储液。
1.3 PBS 稀释 DAPI 储液至 300nM。加入约 300μL 稀释后的 DAPI 染色液至样品盖玻片上，保证没过样本.
1.4 孵育 1~5 分钟。
1.5 PBS 洗涤样本几次，去掉片子上多余的水分。
1.6 选取合适的滤光片观察样本。
流式细胞仪悬浮细胞复染
样品准备：根据需要固定样本。DAPI 染色通常与其他染色步骤同时操作。
2.1 收集细胞悬液调整数量至 2 × 105 to 1 × 106 cells.
2.2 离心收集细胞弃上清液。
2.3 室温加入 1mL PBS 轻弹管壁，使之重悬。
2.4 将上述细胞悬液用移液器慢慢加入到 4mL 的无水乙醇后，zui大转速涡旋混匀，将细胞放置于-20 度，
5～15 分钟。
2.5 离心收集细胞，去掉乙醇。
2.6 加入5mL PBS 重悬细胞，室温放置 15 分钟，使得细胞重新吸收水分。
复染操作
3.1 1mL 去离子水溶解 5mg DAPI 可以得到 14.3mM 的 DAPI 储液。
3.2 配制染色缓冲液(100 mM Tris, pH 7.4, 150 mM NaCl, 1 mM CaCl2, 0.5 mM MgCl2, 0.1% No
40)，稀释 DAPI 储液至 3μM 的工作染色浓度。每一个染色反应大约需要 1mL 的 DAPI 染色工作液
3.3 接上 2.6 步，离心收集细胞，加入 1mL DAPI 染色工作液。
3.4 室温孵育 15 分钟。
3.5 直接上机分析。（如需进行荧光显微镜观察，细胞可以离心后去掉上清，以新鲜缓冲液重新悬浮细胞，
吸取一滴悬浮液加到载玻片上，加盖玻片后观察。）样品准备：根据需要处理样本，1、蒸馏水简单冲洗，去除缓冲液，后的冲洗可以有助于减少非特异性背景，再晾干。
染色质 FISH 复染
复染步骤
4.1 1mL 去离子水溶解 5mg DAPI 可以得到 14.3mM 的 DAPI 储液。
4.2 PBS 稀释 DAPI 储液至 300nM。吸取 300μL 的染色液直接加到样品上，加盖玻片使染色液均匀分布于
样本上。
4.3 避光室温孵育 30 分钟。
4.4 小心移去盖玻片，PBS 或蒸馏水洗涤样本，去掉多余染料。
4.5 加盖玻片，用指甲油或中性树脂封片，或根据需要用抗淬灭试剂封片。
4.6 选取合适的滤光片观察样本。
