KFS144 细胞骨架蓝色荧光探针说明书

细胞骨架蓝色荧光探针

Cat number：KFS144

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For Research Use only

一、产品描述

本染料是 F-肌动蛋白的高亲和力探针，由蘑菇毒素制成，与蓝色荧光染料偶联。 以纳米摩尔浓度使用时，鬼笔毒素是方便的探针，可用于对甲醛固定和打孔的组织切片、细胞培养物或无细胞实验体系中的 F-肌动蛋白进行标记、鉴别和定量。

Ex/Em：350nm/450nm，比抗体染色更优越。适合于固定和通透的样本。

荧光标记的鬼笔环肽与肌动蛋白对于不同的物种，包括植物和动物具有几乎相同的高结合属性。鬼笔环肽结合具有高选择性，而 F-肌动蛋白红色荧光。呈现出很少的非特异性染色。本产品可以用于荧光显微镜、微孔板、比色皿。

二、产品包装

三、操作说明

染色操作

本实验操作不特定针对某一特别的实验体系，但是具有很大的普遍适用性。以下操作以贴壁细胞爬片为例。注：针对贴壁细胞或 96 微孔板样本，每个样建议100μL染色工作液体积，本试剂盒约可操作 80 tests。

甲醛固定细胞

1.1 以预温的 PBS，pH7.4，洗涤细胞两次。

1.2 3.7%甲醛固定细胞，室温 10 分钟。注意：甲醇可能导致肌动蛋白扭曲变形，因此避免选用任何含有甲醇类的固定剂。

1.3 PBS 洗涤两遍。

1.4 丙酮-20 度洗涤盖玻片或者含 0.1% Triton X-100 的 PBS 洗涤 3~5 分钟。

1.5 PBS 洗涤两遍。

1.6 5μL 甲醇原储液加入 200μL 的 PBS 中预染色每张盖玻片，加入 1%BSA 到染色液中，以减少非特异性背

景。同样，在染色之前，也可以选择用 1%BSA 的 PBS 预孵育固定的细胞。

1.7 选择合适的染色液体积，建议 100μL，室温浸泡盖玻片 20 分钟，可以加上封盖，防止水分蒸发。

1.8 PBS 洗涤两遍。

1.9 长期保存，细胞应在空气中晾干，加盖在一个封固封片剂。避光 2-6℃，以这种方式制备的试样保持至

少 6 个月的肌动蛋白染色。

同时进行固定、促渗和罗丹明鬼笔环肽染色

罗丹明鬼笔环肽在 4%的多聚甲醛固定缓冲液中稳定时间较短，需要快速的固定、透化和标记。

2.1 制备 1mL 含有 50~100μg/mL 的 1-十六酰-sn-丙三醇-磷酸胆碱和 3.7%的甲醛溶液，然后添加 5~10units 的染料。

2.2 染色液没过细胞，4 度孵育 20 分钟。

2.3 缓冲液快速洗涤三次。

2.4 封片观察。