KFS142 神经元示踪剂——羰化青 Dil说明书

神经元示踪剂——羰化青 Dil

Cat number：KFS142

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For Research Use only

一、产品描述

长链二烷基羰花青化合物，特别是 Dil（MW：933.88），广泛应用于固定和非固定的组织与细胞中，进行顺行或逆行的神经示踪分析。

Dil 不会影响细胞的活力、生长以及基本生理特性。Dil 标记运动神经元，可在培养基条件下持续跟踪长达四周，在体内长达一年。染料通过在质膜中的缓慢横向扩散均匀标记神经元，0.2~0.6mm/每天/固定标本，在活体组织里，可以达到 6mm/每天。经过醛固定的组织，Dil 的扩增可以持续长达 1~2 年。一般情况下未标记的染料不会向非标记的细胞转移，除非质膜被破坏，比如切片部位。

二、产品包装

三、操作说明

制备储液

固体染料以 DMF 或者 DMSO 或乙醇溶解配制为 1mM 的储液。一旦制成的储液，需避光冷冻，储液形式可保存 6 个月。

标记悬浮细胞

1.1 以无血清培养基悬浮细胞密度为 1X10⁶ 个/mL。

1.2 每 1mL 细胞悬液加入 5μL 细胞标记液，混匀。

1.3 于37℃孵育 1~20 分钟。不同的细胞类型所用的孵育条件不一样，可参考表格 1.初始孵育时间可选择  

20 分钟，随后再进行优化。

1.4 于37 度，1500rpm 5 分钟离心标记悬浮液。

1.5 去上清，用 37 度的培养基轻轻悬浮细胞。

1.6 重复两次以上的洗涤步骤。

1.7 放置 10 分钟后进行荧光测量。

标记贴壁细胞

2.1 培养细胞至所需的汇合度。

2.2 取出爬片，吸去培养基，放到盖玻片湿盒中。

2.3 准备标记，每 1mL 新鲜培养基中加入 5μL 的标记液。

2.4 吸取 100μL 盖玻片周围的染色介质，轻轻铺匀，使之盖满整个爬片。

2.5 于37 度孵育细胞，不同的细胞类型所用的孵育条件不一样，可参考表格 1.初始孵育时间可选择 20 分 

钟，随后再进行优化。

2.6 去掉染色介质，用新鲜预热的培养基孵育 10 分钟，再更换以新的预热的培养基孵育 10 分钟，重复洗涤 

盖玻片三次。

表 1. 优化的细胞染色孵育时间