茜素红染色试剂盒（成骨检测，pH8.3）
Cat number：KFS128
Store at 2-8℃ for for 3 mo
For Research Use o
一、产品说明
茜素红 S 是一种蒽醌衍生物：9,10-二氢-3,4-二羟基-9,10-二氧代-2-蒽磺酸单钠盐，又称媒介红 3（Mordant Red3）或茜素磺酸钠。其分子式为 C14H7NaO7S，分子量为 342.25。茜素红和钙离子以鳌和方式形成复合物，用以识别组织细胞的钙盐成分。钙盐变化是骨细胞增殖分化和骨组织成骨潜能的标志之一。通过茜红素染色，产生桔红色沉积，但会受到其它金属元素的干扰。
本产品 pH8.3 主要适用于动物原生代或培养细胞的钙沉积和钙化结节检测。广泛用于骨细胞或组织病理生理的研究。
二、试剂组成
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组份名称 |
KFS128 |
储存条件 |
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茜素红 S 染色液 |
10mL |
2-8℃，避光 |
注意：以 6 孔板为例，每孔孵育的染色工作液为 500μL，本试剂盒可以做 20tests；以普通切片和 96 孔细胞为例，每张玻片孵育的染色工作液为 100μL，本试剂盒可以做 100tests。
三、自备材料
显微镜、载玻片、盖玻片、无水酒精、二甲苯、中性树胶、亮绿复染液、70%乙醇固定液(不含钙)
四、样本处理
1、6 孔板培养细胞爬片：
去除培养基，1×PBS（pH7.2，不含钙镁）洗涤细胞爬片 2 次，70%乙醇室温固定细胞 60min，去除固定液，1×PBS（pH7.2，不含钙镁）洗涤细胞爬片 2 次后待用。（注意：本步骤的固定液也可用 4%多聚甲醛来替代，室温 15-30min。）
2、冰冻切片：
冰冻切片，室温平衡，1×PBS（pH7.2，不含钙镁）洗涤 2 次，待用。甲醇固定 1-2 分钟。
3、石蜡切片：
① 脱蜡：二甲苯中脱蜡 5-10 分钟。再换用新鲜的二甲苯，脱蜡 5-10 分钟。
② 梯度入水：95%、70%、30%乙醇各 2 分钟，蒸馏水 2 分钟。
五、染色
1、茜素红 S 染色
① 以茜素红染色液覆盖样本，37℃避光孵育至少 60分钟。(如果颜色偏淡，可以适当延长时间。)
② 取出染色玻片，双蒸水缓慢冲洗玻片 3-5 分钟。（注意：细胞爬片样本建议多用 1×PBS，pH7.2，不含钙镁洗涤 5 次，每次 2min，直接显微镜拍照观察。）
2、亮绿染色（组织样本可选步骤）
滴加 1-2 滴亮绿染色液覆盖样本，染色 20-30S。
3、分化透明处理（组织样本可选步骤）
① 盐酸-酒精分化液每片 100μL 覆盖样本 10S 后去除。
② 无水酒精脱水，二甲苯透明。
③ 封片剂封片后，显微镜观察，拍照。
六、染色结果
钙沉积阳性细胞呈现桔红色；胞浆及胶原纤维呈现绿色（可选）。
