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人可溶性血管细胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA试剂盒使用说明书

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  • 更新日期:2017-01-06 15:59
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详细介绍
 人可溶性血管细胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA试剂盒处理及要求:
1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为180μg/L,120μg/L,60μg/L,30μg/L,15μg/L)。
加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
温育:操作同3。
洗涤:操作同5。
显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟. 
终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。 人可溶性血管细胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA试剂盒
甲基二氯硅烷 4-氯-2-氟苯甲酸 二十九烷
(三氟甲基)三甲基硅烷 3-氨基-4-氟苯甲酸甲酯 二十六烷
三甲基溴硅烷 4-乙氧基-3-硝基吡啶盐酸盐 三十一烷
氰基三甲基硅烷 1-(2,4,6-三异丙基苯磺酰)-1,2,4-三唑 二十一烷
(三甲基硅烷基)重氮甲烷 2-乙基己酰氯 乙基环己烷
三(五氟苯基)硼烷 炔孕酮 三十烷
三(三甲硅基)硅烷 2-氰基丁二酸二甲酯 1,1-二氯乙烷
氯碘甲烷 4-碘苯甲醛 溴代十六烷
三乙基硅烷 2-氟-3-羟基吡啶 金刚烷
十六烷基三甲氧基硅烷 BOC-DL-色氨酸 4,4'-四甲基二氨基二苯甲烷
十八烷基三甲氧基硅烷 4,4,4-三氟-1-碘丁烷 三羟甲基丙烷(TMP)
1-氯-6-苯基己烷 3-氟-2-甲基苯酚 三羟甲基氨基甲烷(TRIS)
 人可溶性血管细胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA试剂盒
 
 
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