免疫印迹 代做免疫印迹Western Blot实验，代做WB实验

成功完成Western Blot检测，必须满足4个条件：

成功进行WB检测，则设置合适正确的对照是必不可少的，只要正确设置了这些对照，即可快速和准确的找到WB的问题所在，并保证实验结果的准确性和特异性！一般需要设置的对照如下：

1)根据检测蛋白的位置选择合适的裂解buffer：

亦可购买商业化的蛋白提取试剂盒来保证标本制备的质量

2)选择合适的蛋白酶抑制剂，避免蛋白降解，从而保证检测的准确性！

常用的蛋白定量方法：Bradford assay, Lowry assay 或BCA assay。定量后，可根据情况将标本保存在-20°C /-80°C备用，进行免疫沉淀（IP）或者直接进行电泳分离蛋白

根据待测蛋白状态确定电泳条件：

根据待测蛋白分子量大小确定凝胶浓度

根据不同的检测目的和待测蛋白的特性，选择合适的膜类型。常用的转移膜类型有：PVDF膜、硝酸纤维素膜（NC膜）和尼龙膜，其中PVDF和NC膜的使用频率zui高。各种膜的技术参数及比较如下：

去掉膜上多余的非特异性结合位点，降低背景。常用的封闭溶液有：含BSA或者脱脂奶粉的TBST或TBS

一抗的选择成功与否，是整个WB实验成功的关键：选择一抗有以下几个注意点：

一抗的保存和使用：

WB常用内参及其技术参数：

根据说明书推荐浓度使用TBST稀释一抗。如果说明书没有推荐浓度，可进行多个稀释比例进行摸索稀释度（1:1000-1:20000）。孵育条件一般为室温1-2小时

选择显色或者化学发光底物。一般倾向于化学发光，灵敏度高且背景低，节省抗体用量

凝胶成像系统检测或者暗室曝光到胶片

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