改良柠檬酸钠抗原修复液(50×)操作注意事项

产品名称：改良柠檬酸钠抗原修复液(50×)
英文名称 : Sodium Citrate Antigen Retrieval Solution,50×
规    格：100ml
用    途：用于石蜡切片、冰冻切片等样品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复。
注意事项：常用的抗原修复液,主要由柠檬酸钠、EDTA组成
储存条件：4℃,12个月

简介：
细胞或组织用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后，会导致细胞内抗原形成醛键、羧甲键而被封闭了部分抗原决定簇，同时蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽，导致免疫染色时染色信号减弱，甚至出现一些假阴性染色结果。所以要求在进行免疫组化染色时，需要行抗原修复或暴露，即将固定时分子之间所形成的交联破坏，而恢复抗原的原有空间形态。从而提高抗原的检出率，降低背景染色，提高检测的准确性。

柠檬酸钠抗原修复液(Citrate Antigen Retrieval solution，50×)是一种常用的抗原修复液，可以用于石蜡切片、冰冻切片等样品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复。可以有效去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联，充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位，从而大大改善免疫染色效果。

通常石蜡切片都需进行抗原修复处理，而冰冻切片可以不进行抗原修复处理。抗原修复可以提高石蜡切片的免疫染色效果，亦可以不同程度的提高冰冻切片的染色效果。当冰冻切片免疫染色效果不理想时，考虑进行抗原修复。

按照每个片子需要10ml抗原修复液(1×)计算，100ml抗原修复液(50×)可以用于500个样本的抗原修复。

自备材料：
1、系列乙醇
2、双蒸水或去离子水
3、加热设备
4、免疫染色洗涤液

操作步骤（仅供参考）：
（一）石蜡切片
1、脱蜡至水
①二甲苯3次，每次3～5min。
②无水乙醇脱水2次，每次3～5min。
③95%的乙醇，3～5min。
④90%的乙醇，3～5min。
⑤80%的乙醇，3～5min。
⑥70%的乙醇，3～5min。
⑦蒸馏水冲洗2次，每次3～5min。

2、抗原修复
①用去离子水或双蒸水稀释CitrateAntigenRetrievalsolution(50×)至1×。
②将切片浸泡在抗原修复液(1×)中，95℃或沸水加热约10～30min。
③抗原修复液(1×)使用前需预热到95～100℃。如果使用微波炉加热，避免暴沸和过多的水分蒸发。随后大约在20～30min内冷却至室温。

3、免疫染色洗涤液洗涤1～2次，每次3～5min。4、进行封闭等后续的免疫染色步骤。

（二）冰冻切片
1、用去离子水或双蒸水稀释CitrateAntigenRetrievalsolution(50×)至1×。
2、免疫染色洗涤液洗涤切片5min。
3、将切片浸泡在抗原修复液(1×)中，95℃或沸水加热约10～30min
4、抗原修复液(1×)使用前预热至95～100℃。如果使用微波炉加热，避免暴沸和过多的水分蒸发。随后大约在20～30min内冷却至室温。
5、免疫染色洗涤液洗涤1～2次，每次3～5min。
6、进行封闭等后续的免疫染色步骤。

（三）其它样品其它样品参考石蜡切片或冰冻切片进行操作。

注意事项：
1、浸泡在抗原修复液(1×)中，佳的加热时间需根据不同的样品和目的蛋白自行摸索。
2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。