伊文思蓝染色液(0.5%)使用方法

中文名称：伊文思蓝染色液(0.5%)
规格：100ml
分类：神经染色
储存方式：室温,避光,12个月
产品用途：组织切片染色,测定血脑屏障完整性 、染色区分活细胞、测定血容量
注意事项：主要由依文思蓝、磷酸盐溶液等组成。


产品简介：
伊文思蓝(Evans+Blue)又称偶氮蓝，分子式C34H24N6Na4O14S4，分子量为960.80，CAS号为314-13-6伊文思蓝与台盼蓝都是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性和细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。活细胞因有外排功能而无法被伊文思蓝染色，因此可以通过此方法在显微镜下区分死细胞与活细胞，但无法区分死亡与坏死。


使用方法：
一、血脑屏障通透性
1.1 取处理后的动物（以小鼠为例），静脉注射伊文思蓝染色液（0.5%），使得小鼠眼睛、皮肤出现蓝色。0.5～1h 后处死小鼠，取出目的脑组织。【注意】：伊文思蓝染色液的注射用量需要根据动物类型以及体重来决定。
1.2将脑组织置于 1.5ml 离心管中，加入 1ml PBS，迅速用组织匀浆器将脑组织制成匀浆，4℃离心。
1.3取上清，加入等量三，4℃孵育。该步骤亦可采用如下操作：取上清，按上清：丙酮=3:7比例加入丙酮，室温孵育24h。
1.4 4℃离心15min。
1.5 取上述溶液，用分光光度计测 620 nm下的OD值。同时测定已知不同梯度的标准伊文思蓝的OD值，绘制标准曲线。根据标准曲线计算出待测样品的伊文思蓝含量。

二、细胞活力鉴定
2.1 取 100μl 重悬细胞到常规离心管内，加入100μl 伊文思蓝染色液（0.5%）轻轻混匀(染色时间可适当延长，但不宜超过 10min)。
2.2吸取少量经过染色后的细胞，用血细胞计数板计数。通常如果要比较地进行定量，每个细胞样品至少数500个细胞，数出蓝色细胞和细胞总数。
细胞存活率计算公式如下： 细胞存活率＝（细胞总数－蓝色细胞数）/细胞总数×

注意事项：
1、Evans+Blue+Stain对人体有轻微毒性，请小心防护。
2、细胞染色时，注意凋亡小体偶尔也有拒染现象。
3、血脑屏障通透性实验中，Evans Blue Stain注射量应根据不同动物以及动物的重量调整。
4、好采用低温冷冻离心机进行离心。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。