普鲁士蓝染色液(中性红法)操作步骤

中文名称：普鲁士蓝染色液(中性红法)
产品规格：2×50mL|2×100mL
用途：组织三价铁染色，含铁血黄素染色
注意事项：又称Perls染色液，或者柏林蓝反应。染色结果为：三价铁或含铁血黄素呈蓝色，其他呈红色。推荐采用该法作为含铁血黄素的主要染色法。
储存条件：室温，避光，12个月

产品概述：
含铁血黄素(Hemosiderin)是一种血红蛋白源性色素，为金黄色或棕黄色颗粒，因其含铁，且为金黄色，故称为含铁血黄素。Perls普鲁士蓝反应(Prussian blue+reaction)又称为含铁血黄素染色，即经过亚铁化钾和稀酸处理后可以产生蓝色，常见于吞噬细胞或间质内。普鲁士蓝染色用于显示局部组织内的各种出血性病变，常见于吞噬细胞内，可以很好地区分含铁血黄素与其他色素。该染色液稳定性好、可以长期保存、不易产生沉淀、应用范围广，可以进行复染，该染色液的复染液采用中性红。


使用方法：
(一)石蜡切片染色：
1、组织固定于10%中性福尔马林，常规脱水包埋。
2、切片厚度4μm，常规脱蜡至水。
3、蒸馏水水洗1min。
4、切片入Perlsstain(见注意事项2)，浸染15～30min。
5、蒸馏水充分冲洗5～10min。
6、入伊红染色液，淡染细胞核15～30s。
7、自来水冲洗1～5s。
8、常规脱水透明，中性树胶封固
(二)冰冻切片染色：
1、无需脱蜡，直接迅速用蒸馏水冲洗2～3min。
2、染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤。
(三)细胞染色：
1、4%多聚甲醛固定10～20min
2、自来水冲洗2次，每次2min。
3、蒸馏水冲洗2次，每次2min。
4、染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤。

染色结果：
含铁血黄素或三价铁 蓝色
细胞核、其他组织 红色

注意事项：
1、切片脱蜡应尽量干净。组织固定常采用10%中性福尔马林，经普通福尔马林长期固定后，组织会有损伤。避免使用酸性固定剂，铬酸盐处理也会妨碍铁的保存。
2、整个操作过程中容器要干净，避免用金属铁制品，洗切片和容器时以蒸馏水为宜，因普通水内含铁质。Perlsstain染色时，应根据样本情况调整着色时间。
3、所有切片都应使用同一个阳性对照切片，选择适合的对照非常重要。尸检肺组织是一个很好的对照，包含相当数量的铁阳性巨噬细胞(心衰细胞)。
4、冰冻切片和细胞染色，好根据具体情况摸索实验条件。