碱性磷酸酶染色液(改良Gomori钙钴法)

产品：碱性磷酸酶染色液(改良Gomori钙钴法)
产品分类：酶类染色
储存条件：4℃,避光,3个月
规格：3×50ml
产品信息：碱性磷酸酶染色
注意事项：属于金属沉淀法,碱性磷酸酶活性出呈棕黑色,可能出现假阳性,采用阴性对照。二甲苯应采用AR以上级别。

简介：
碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需zui适pH 9.2~9.8。此酶主要存在于物质交换活跃之处（细胞膜），如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮。此酶还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌之细胞膜及吞饮小泡。

现用金属沉淀法来显示碱性磷酸酶活性。此法以天然存在的β-甘油磷酸钠为底物，经酶水解释放出磷酸，立即被钙离子沉淀为磷酸钙，再依次被置换为磷酸钴和硫化钴,zui终产物为黑色硫化钴沉淀。

自备材料：
1、 蒸馏水
2、温箱或水浴锅

操作步骤（仅供参考）：
(一)石蜡切片染色
1、石蜡切片脱蜡至蒸馏水。
2、切片入 ALP 孵育液中，37°孵育2~12h。
3、流水洗 2min， 入蒸馏水。
4、入硝酸钴溶液中，37°孵育5min。
5、流水洗 5min， 入蒸馏水。
6、在上述过程中配制ALP硫化工作液，即取试剂（C）用蒸馏水稀释50倍，即为ALP硫化工作液，即配即用。切片入硫化工作液，孵育2min。
7、流水洗 10min， 入蒸馏水。
8、（可选）核固红复染细胞核，蒸馏水洗。
9、石蜡切片常规脱水、透明，树胶封片。
（二）冰冻切片染色
1、冰冻切片在丙酮氯-仿等量混合液内，4℃固定2-5min。
2、切片入ACP孵育液，置于37℃孵育5-15min。
3、流水洗 2min， 入蒸馏水。
4、入硝酸钴溶液中，37°孵育5min。
5、流水冲洗5min， 入蒸馏水。
6、在上述过程中配制ALP硫化工作液，即取试剂（C）用蒸馏水或者去离子水稀释50倍，即为ALP硫化工作液，即配即用。切片入硫化工作液，孵育1-2min。
7、流水洗 10min， 入蒸馏水。
8、（可选）核固红复染细胞核，蒸馏水洗。甘油明胶封片。

染色结果：
酶活性补位：黑素硫化铅沉淀
细胞核：根据复染液不同而不同

阴性对照：（可选）
1、ALP对照液为不含底物的孵育液。取相同的切片入ALP对照液，其余同上。结果为阴性。
2、（备选方案）切片进入ALP孵育液之前，可先经碘液和5%硫代硫酸钠溶液各3min，充分水洗后再进行孵育等步骤，可用此法做阴性对照。

注意事项：
1、ALP孵育液、ALP硫化液易失效，zui好分成小分储存。一经开启立即使用。
2、ALP硫化液具有腐蚀性和刺激性气味，应小心操作。
3、对冰冻切片染色时,应减少切片在室温暴露的时间。
4、样本需新鲜，取材后应立即处理，否则会影响酶的活性。
5、组织固定需在4°冰箱进行，时间不宜超过24h，否则酶活性会减弱或消失。