胰蛋白酶-CaCl2溶液(0.1%)说明书

中文名称：胰蛋白酶-CaCl2溶液(0.1%)

用途：培养细胞的消化，或者一些组织的消化

注意事项：无菌溶液，主要由0.25%胰酶或胰蛋白酶、0.1%氯化钙组成，过滤除菌。

储存条件：-20℃，12个月

简介：胰蛋白酶(Trypsin)是由胰脏产生没有活性的胰蛋白酶原分泌到小肠后，小肠内的肠肽酶会活化该酶原，形成胰蛋白酶。胰蛋白酶的特点在于已经活化的胰蛋白酶，能够继续活化geng多胰蛋白酶原，这种过程即自动催化。胰蛋白酶在小肠工作，它会将蛋白质水解为肽，进而分解为氨基酸，其zui适温度约为37℃;主要由0.25%胰酶、0.1%氯化钙等组成，经过滤除菌。本试剂可以直接用于培养细胞的消化，或者一些组织的消化，通常室温下1min左右就可以消化下大多数贴壁细胞。

操作步骤(仅供参考)：
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量Trypsin-CaCl2 solution，略盖过细胞即可，室温放置0.5～2min，不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入Trypsin-CaCl2;solution重新消化
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落，直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g离心1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。


2、组织的消化
不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。

注意事项：
1、尽量减少反复冻融的次数，以免失效。
2、在使用胰酶细胞消化液的过程中，要特别注意避免消化液被细菌污染。胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长，否则细胞铺板后生长状况会较差。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效