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人核基质蛋白22(NMP-22)ELISA试剂盒说明书

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  • 更新日期:2019-12-17 10:08
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详细介绍

中文名:人核基质蛋白22NMP-22ELISA试剂盒

规格:48t/96t

保存:2~8℃

有效期:6个月

检测范围:0.5U/ml - 20U/ml

使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中核基质蛋白22(NMP-22)含量。

样本:血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。

特点:敏感性高、特异性强、重复性好、试剂稳定、易保存,操作简便。

用途:用于测定血清,血浆及相关液体样本中相关含量或活性。

种属:人、大鼠、小鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛、羊、鸡、鸭、鱼等。

运输方式:现货供应,一般为快递运输,江浙沪隔天到,外地及偏远地方三至五天时间到货。

检测原理:采用双抗体夹心ABC-ELISA法。

 

 

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人核基质蛋白22(NMP-22)水平。用纯化的人核基质蛋白22(NMP-22)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入核基质蛋白22(NMP-22),再与HRP 标记的核基质蛋白22(NMP-22)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的核基质蛋白22(NMP-22)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中人核基质蛋白22(NMP-22)浓度。

 

试剂盒组成

1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 7 终止液 6ml×1

2 酶标试剂 6ml×1 8 标准品(32U/ml 0.5ml×1

3 酶标包被板 12 ×8 9 标准品稀释液 1.5ml×1

4 样品稀释液 6ml×1 10 说明书 1

5 显色剂A 6ml×1 11 封板膜 2

6 显色剂B 6ml×1/ 12 密封袋 1

 

标本要求

1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

2.不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

 

操作步骤

1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

16U/ml 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液

8U/ml 4 号标准品 150μl 5 号标准品加入150μl 标准品稀释液

4U/ml 3 号标准品 150μl 4 号标准品加入150μl 标准品稀释液

2U/ml 2 号标准品 150μl 3 号标准品加入150μl 标准品稀释液

1U/ml 1 号标准品 150μl 2 号标准品加入150μl 标准品稀释液

2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。

4. 配液:将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此重复5 次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7. 温育:操作同3

8. 洗涤:操作同5

9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10 分钟.

10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后15 分钟以内进行。

 

计算

以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

 

注意事项

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间zui好控制在5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4. 请每次测定的同时做标准曲线,zui好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD 值大于标准品孔*孔的OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

 

保存条件及有效期

1.试剂盒保存:;2-8℃

2.有效期:6 个月

 
 
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