BTN70804 一步法单菌落质粒DNA提取试剂盒说明书

一步法单菌落质粒DNA提取试剂盒说明书

产品编号：BTN70804

规格：50T

产品及特点：

本产品是在百奥莱博一步式质粒DNA提取试剂盒（BTN70301）基础上开发的、能够从单个菌落快速提取质粒DNA 的产品。它之所以能够从单个菌落中提取到可以用常规电泳方法检测得到的质粒DNA 是由于一步式细菌裂解技术能够使细菌释放出其几乎所有的质粒DNA。本产品具有下列特点：

1. 不需过夜培养细菌就可以提取质粒DNA，能为研究人员节约一天的宝贵时间。

2. 快速，整个过程只需要不到十分钟（对一个样品而言）。

3. 一步式裂解细菌，不使用强碱溶液，对DNA 损伤小。

4. 得到的质粒DNA 足够1-2 次电泳或酶切实验，足够多次PCR、测序和细菌转化实验。

5. 适用于高拷贝、中拷贝和低拷贝的质粒。

格及成分：

保存条件：

常温运输及保存（溶液A 需要4℃保存），有效期一年。

使用方法：

1. 用吸头挑取一个直径在2 mm 以上的菌落到100 μL 一步法单菌落质粒DNA提取试剂盒溶液A 中（溶液A 用前摇匀），充分吹打或振荡裂解直到裂解液变澄清。

2. 直接将裂解液全部转移到离心吸附柱中，室温静置2 分钟使质粒DNA 与膜结合。室温12000-15000 g 离心半分钟，弃穿透液。

3. 在离心吸附柱中加入0.7 mL 的通用预洗液，室温12000-15000 g 离心半分钟，弃穿透液。注意: 如果通用预洗液放置在低温产生了沉淀，用前需要加热到60℃左右使之融化，混匀后再用。

4. 再在离心吸附柱中加入0.3 mL 的通用预洗液，室温12000-15000 g 离心半分钟，弃穿透液。此步预洗zui好别省略，否则DNA 纯度不高。

5. 在离心吸附柱中加入0.7 mL 的通用洗柱液，室温12000-15000 g 离心半分钟，弃穿透液。

6. 再在离心吸附柱中加入0.7 mL 的通用洗柱液，室温12000-15000 g 离心半分钟，弃穿透液。此为第二次洗涤。

7. 再在离心吸附柱中加入0.4 mL 的通用洗柱液，室温12000-15000 g 离心半分钟，弃穿透液。此为第三次洗涤，如果不洗涤三次，zui后得到的质粒DNA 的OD260 和280 的比值达不到1.8。

8. 室温12000-15000 g 离心半分钟，甩干残留液体。注意：此步不能省略，否则残留乙醇会影响后续的电泳上样（DNA 沉不到加样孔里去）和酶反应。

9. 将离心柱置于一个新的1.5 mL 自备塑料离心管中，加入30-100 μL DNA洗脱液2.0，室温放置2 分钟。如果将DNA 洗脱液2.0 预热到65-80℃，则效果更好。

10. 室温12000-15000 g 离心半分钟，离心管底部溶液即为质粒DNA，可以直接用于后续实验或放冰箱长期保存。