BTN60802 柱式细菌DNA提取试剂盒说明书

柱式细菌DNA提取试剂盒说明书

产品编号：BTN60802

规格：50T(A)/50T(B)

产品及特点：

本产品是在细菌DNA提取试剂盒础上开发的柱式升级产品，可以用于大多数革氏阳性和阴性细菌基因组DNA的快速提取。

1. 操作简单，整个过程不到20分钟。

2. 产率一般在5-20μg/mL过液培养的饱和菌液（10⁸-10⁹个细胞）。

3. OD260/280一般在1.8以上，可直接用于PCR、酶切、杂交等实验。

4. DNA片段长度一般在40-50 Kb左右。

5. 每次提取可以处理0.1-1.5mL的细菌，也可以使用菌落。

6. 价廉物美，与国外同类产品相比质量相当，但价格。

7. 安全，本试剂盒对人体无害，无腐蚀性和刺激性气味。

8. 本产品分A型（无溶菌酶，适用于革氏阴性细菌）和B型（含溶菌酶，适用于革氏阳性细菌）。

规格及成分：

保存条件：

常温运输及保存（溶菌酶需要-20℃保存），有效期一年。

自备试剂：

氯fang、自备无菌水。

使用方法：

注意：溶液A和溶液B容易产生沉淀，溶液B十分粘稠，均需要放置在65℃预热使沉淀溶解、粘稠度降低，用前充分摇匀。

一: 对革氏阴性细菌样品，只需用A型

1. 将0.1-1.5 mL过夜培养的菌液转移到1.5mL离心管中，12000rpm室温离心1min沉淀细菌，弃上清。

2. 加入300μL预热的溶液A到细菌沉淀中，充分吹打均匀。

3. 再加入150μL预热的溶液B到离心管中，颠倒数次混匀。此时溶液中可能有白色丝状悬浮物产生。由于溶液B比较粘稠，可以采取称量方法取用，150μL约等于150-160 mg。也可以将1mL枪头剪去一截再吸取。

4. 65℃放置3-5分钟。如果室温放置，DNA产量会降低10-20%。

5. 加入200 μL自备氯fang，震荡混匀10-30秒，此时溶液将呈乳白色。

6. 12,000 rpm室温离心2分钟。此时上清液将变得透明，中间层有白膜。小心转移上清液到一个新的1.5mL塑料离心管中，避免触及中间层的白膜。

7. 加入1.5倍体积(约0.7mL)的溶液C，颠倒混匀后全部转移到离心吸附柱中，室温放置至少2分钟。

8. 12,000 rpm室温离心1分钟，DNA将吸附在离心吸附柱的膜上，倒弃收集管中的穿透液。

9. 将0.5mL通用洗柱液加入离心柱中，12,000 rpm室温离心1分钟，弃穿透液。

10. 重复上步操作一次。

11. 空甩半分钟去除残留液体,将离心吸附柱转移到新的1.5mL离心管中。

12. 加50-100μL通用洗脱液，室温放置3-5分钟。

13. 12,000 rpm室温离心1分钟即得DNA溶液。

14. 由于本产品使用的离心吸附柱吸附DNA的能力较强，可以重复上步操作一次以便得到更多的DNA。

15. 直接取5-10μL电泳检测DNA，其余放冰箱备用。

二: 对革氏阳性细菌样品，需用B型（含溶菌酶）

1. 将0.1-1.5 mL过夜培养的革氏阳性细菌12,000 rpm室温离心1分钟后, 重悬于0.6 mL溶菌液中（溶菌液配制:30 mL无菌水+600 mg溶菌酶，配制后zui好分装成小管并放-20℃长期保存，每次只用一小管)，颠倒混匀5-10次后放37℃保温至少30分钟(有的革氏阳性菌种可能需更长时间，自己摸索)。

2. 12,000 rpm室温离心10分钟，小心弃上清。

3. 后续处理接上面的革氏阴性细菌提取步骤中的第2步。

三: 其他注意事项

1. 可以直接使用细菌菌落提取DNA，操作时直接将细菌菌落挑入到溶液A中，后续操作同上。

2. 从单个菌落中提取到的DNA较少，所以只用30μL通用洗脱液洗脱。

使用效果：

 

图注:用本产品提取1.0mL过夜培养的E.coli Tg1细菌，DNAzui后溶于100μL TE中，取20μL上样。M表示全长的λDNA,其余均为提取的样品DNA。