细菌DNA提取试剂盒说明书
产品编号：BTN60707
规格：50T/250T
产品及特点：
本产品可以用于大多数革氏阳性和阴性细菌基因组DNA的快速提取。
1. DNA纯净，OD260/280一般都在1.9左右，可直接用于PCR、酶切、杂交等实验。
2. DNA产量一般在5-20μg/mL饱和菌液（108-109个细胞）。
3. 操作简单，整个过程约15分钟，容易放量操作。
4. 每次提取可以处理0.1-1.5 mL的细菌，也可以使用菌落。
5. 价廉物美，与国外同类产品相比质量相当，但价格。
6. 安全，本试剂盒对人体无害，无腐蚀性和刺激性气味。
规格及成分：
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成分 |
50T |
250T |
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溶菌酶 |
600mg |
3g |
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溶液A |
30ml |
150ml |
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溶液B |
7.5ml |
40ml |
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RNase A溶液（10mg/mL） |
0.75ml |
4ml |
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说明书 |
1份 |
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保存条件：
常温运输及保存（溶菌酶需要-20℃保存）有效期一年。
自备试剂：
超纯水、氯fang和TE缓冲液。
使用方法：
注意：溶液A和溶液B容易产生沉淀，溶液B比较粘稠，用前均需要放置在65℃预热使沉淀溶解、粘稠度降低，用前充分摇匀。
一: 对革氏阴性细菌样品
1. 将0.1-1.5 mL过夜培养的菌液转移到1.5 mL塑料离心管中， 12000-15000 g室温离心1分钟沉淀细菌，弃上清。
2. 加入600 μL预热的溶液A到细菌沉淀中，充分吹打均匀。
3. 再加入150 μL 预热的溶液B到离心管中，颠倒数次混匀。此时溶液中可能有白色丝状悬浮物产生。由于溶液B比较粘稠，可以采取称量方法取用，150 μL 约等于150-160 mg。也可以将1 mL 枪头剪去一截再吸取。也可以同时加入15 μL的RNase A溶液。
4. 65℃放置3-5分钟。如果室温放置，DNA产量会降低10-20%。
5. 加入200 μL自备氯fang，震荡混匀10-30秒，此时溶液将呈乳白色。
6. 12000-15000 g室温离心2分钟。此时上清液将变得透明，中间层有白膜。小心转移上清液到一个新的1.5 mL塑料离心管中，避免触及中间层的白膜。
7. 加入1倍体积(约750 μL)的异丙醇到上清液中，用手上下颠倒30秒混匀。此时一般将有絮状DNA沉淀出现。
8. 12000-15000 g室温离心3分钟。此时管底将有微小DNA沉淀，小心弃上清，注意不要丟弃DNA沉淀。
9. 在离心管中加1 mL 75%乙醇，短暂震荡，12000-15000 g室温离心3分钟，弃上清。
10. 重复上述操作一次。
11. 短暂离心，小心吸弃残留的液体（约50 μL）。此步不要省略，否则残留的液体（含乙醇）将会影响DNA电泳、酶切很PCR等反应。
12. 立即加入50-100 μL TE缓冲液充分溶解DNA沉淀。注意：由于基因组DNA较长并在沉淀时形成紧密复合物，充分溶解的时间远长于质粒DNA或PCR片段，有时需要长达数小时。如果在第3步没有加RNase A溶液，或虽然加了但还担心有残留的RNA污染，可以在此时补加5-10 μL 的RNase A溶液，保温30分钟。
13. 直接取5-10 μL电泳检测DNA，其余放冰箱备用。
二: 对革氏阳性细菌样品
1. 将0.1-1.5 mL过夜培养的革氏阳性细菌12000-15000 g室温离心1分钟后, 重悬于0.6 mL溶菌液中（溶菌液配制:30 mL超纯水+600 mg溶菌酶，配制后zui好分装成小管并放-20℃长期保存，每次只用一小管)，颠倒混匀5-10次后放37℃保温至少30分钟(有的革氏阳性菌种可能需更长时间，需要自己根据不同的细菌摸索)。
2. 12000-15000 g室温离心10分钟，小心弃上清。
3. 后续处理接上面的革氏阴性细菌提取步骤中的第2步。
三: 其他注意事项
1. 可以直接使用细菌菌落提取DNA，操作时直接将细菌菌落挑入到溶液A中，后续操作同上。
2. 从单个菌落中提取到的DNA较少，所以只用10-30μL TE溶解。
