液相内毒素清除剂说明书
产品编号：BTN60607
规格：100T/500T
产品及特点：
去除液体生物样品（包括质粒DNA 样品）中污染的内毒素(endotoxin)具有重要的临床意义，因为内毒素对原代细胞、传代细胞和整体动物均具有显著的毒性作用。由于内毒素(化学本质为脂多糖，即lipopolysaccharides)是包括E.coli在内的革兰氏阴性细菌细胞壁的主要组成成分，并且带电性跟DNA 类似，所以从E.coli 细胞中提取的质粒DNA 和重组蛋白质药物中常常含有大量的内毒素污染，并且很难用用常规方法（包括硅胶膜吸附，离子交换吸附、凝胶排阻过滤、氯化铯超速离心）去除。本产品就是专门用于去除生物样品中的内毒素污染。
1. 简单快速，一次处理只需要20 分钟左右，不需要复杂仪器设备。
2. ，一次处理可以去除90%以上的内毒素，经过三次重复抽提可将内毒素的水平降低到0.2 EU(endotoxin unit，约0.1 ng LPS)/mL以下。
3. 适用范围广，可用于DNA、RNA、蛋白质或其他生物样品。
4. 不影响DNA 和大部分蛋白质的活性，处理过的质粒DNA 可用于转染实验。
5. 既可小规模使用(在1.5 mL 离心管内)，也可放量使用。
规格及成分：
|
成分 |
100T |
500T |
|
液相内毒素清除剂 |
5ml |
25ml |
|
说明书 |
1份 |
1份 |
保存条件：
常温运输，4℃保存，有效期一年。
自备试剂：
无内毒素的水或TE 缓冲、3M 醋酸钠、乙醇。
使用方法：
如果使用前本产品有分层，冰浴后振荡混匀。
一：用于体积小于500 μL 的DNA/RNA样品
1. 在一干净的离心管中加入500 μL 的样品。如果不足500 μL,可以用水或TE补足。
2. 加入50 μL 的3 M 醋酸钠（pH 5.2），混匀后冰浴5 分钟。
3. 加入50 μL 预冷的本产品，充分混匀后冰浴10 分钟。
4. 65℃水浴直到溶液变浊或出现分层为止（一般需要1-5 分钟）
5. 室温12000-15000×g 离心2 分钟(不能低温离心)，离心后上层为无色透明，下层为淡蓝色。
6. 将上清转移到新的离心管中。
7. 如果需要，可以重复步骤3～6。
8. 加1 倍体积的异丙醇或两倍体积的乙醇，混匀, 12000-15000×g 离心30分钟。
9. 弃上清后用70%酒精洗2 次。
10. 空气干燥沉淀后加入100 μL 无内毒素的水或TE 缓冲液溶解沉淀。
11. 测定DNA 和内毒素的含量，与未纯化的样品比较。
二：用于体积大于500 μL的DNA/RNA样品
整个操作同上，只是在15 或50 mL 塑料离心管中进行，离心速度不能超过离心管的承受力。
三：整合到碱变性法质粒DNA 制备过程中
整个操作同上，只是：
1. 样品必须是加溶液III 离心后得到的上清液或zui后得到的质粒溶液。
2. 如果处理的是加溶液III 离心后得到的上清液，可以略去第2 步操作。
3. 处理后的溶液需要用试剂盒提供的或自备的上柱液调整盐离子浓度，然后上柱，以后的操作按试剂盒提供的操作手册进行。
4. 洗脱DNA 所用水或溶液必须无内毒素污染。
四：对蛋白质和其它生物样品
整个操作同上，只是：
1． 略去第2 步操作，加3 M 醋酸钠（pH 5.2）只为沉淀核酸。
2． 第4 步改为37℃保温以免蛋白质变性，溶液呈混浊状或分相一般需要20-30分钟。
3． 略去第8 步和以后操作。
疑难解答：
Q:为何用常规的方法很难去除生物样品中的内毒素?
A:因为内毒素带电性跟DNA 和部分蛋白质相同，所以基于带电性的分离方法(如硅胶膜吸附，离子交换吸附)不能将它们分开;同时内毒素又是双性分子（类似于细胞膜的磷脂分子），能够形成大小不等的聚合物，跟质粒DNA 和蛋白质大小接近，所以基于分子量大小的分离方法(如凝胶排阻过滤和氯化铯超速离心)也不能将其有效分离。
