真菌DNA提取试剂盒说明书
产品编号：BTN60304
规格：50T
产品及特点：
本产品是基于液氮研磨法的真菌基因组DNA 快速提取试剂盒，尤其适用于从真菌的菌丝体和子实体提取DNA（如果提取孢子和有坚硬细胞壁的单个真菌细胞，则建议选用本公司的玻璃珠法柱式真菌DNAout），提取过的真菌包括酵母（如：Saccharomyces cerevisiae、Schizosaccharomyces pomb、Pichia pastoris）、动物病原真菌（如：Candida albicans、Aspergillus niger）和植物病原真菌（如：Collectotrichum musae、Fusarium oxysporum）。本产品的主要特点是：
1. DNA 纯净，OD260/280 一般都在1.9 左右，可直接用于PCR、酶切、杂交等。DNA 大小在50 Kb 左右。
2. 操作简单，整个过程约30 分钟左右，比大多数同类产品短。
3. 液体培养物处理量在0.1-3 mL 之间，真菌菌丝、子实体的处理量在0.1-0.5 g 之间。
4. 价廉物美，与国外同类产品相比质量相当，但价格。
5. 安全，不需要使用氯化苄等有毒物质，本试剂盒对人体，无腐蚀性和刺激性气味。
规格及成分：
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成分 |
规格 |
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溶液A |
50ml |
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溶液B |
50ml |
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RNase A溶液（10mg/ml） |
0.75ml |
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说明书 |
1份 |
保存条件：
常温运输及保存，有效期一年。
自备试剂：
氯fang、异丙醇、70%乙醇、TE 缓冲液。
使用方法：
1. 先将全部RNase A 溶液全部加入到溶液A 中，摇匀后再取用，未用完的溶液A zui好在4℃保存。
2. 称取0.1-0.5g 湿的真菌菌丝、子实体或0.1-3 mL 液体培养物离心得到的沉淀，转移到塑料研钵中，液氮研磨成粉后转移到一个干净的1.5 mL 塑料离心管中。注意：zui好避免使用含二氧化硅的玻璃研钵，因为DNA 会吸附在表面，影响得率。如果菌丝或子实体等已经十分干燥，则使用量zui好比上面推荐的使用量低5-10倍；如果需要预先从环境中对真菌进行纯化(如从血液病原真菌中提取DNA，则需要先去除红细胞等成份)，请按相关的标准方法先将该真菌预纯化出来，以沉淀物的形式放液氮研磨。
3. 在离心管中加入1 mL 65℃预热的溶液A 并用移液枪头充分吹打混匀（如果溶液A 有沉淀，需先在65℃加热溶解后摇匀再使用）。
4. 65℃保温5-30 分钟，其间zui好吹打混匀2-3 次。
5. 12000-15000 g 室温离心3 分钟，将不超过0.75 mL 的上清转移到新离心管中。有时候上清液中还会有少量细小悬浮物，但对后续操作没有影响，不必进行特殊处理。
6. 在上清液中加入等体积的溶液B，上下颠倒30 秒充分混匀，溶液将呈白色混浊状，将其置于冰浴中放置5-10 分钟。
7. 12000-15000 g 室温离心3 分钟，转移上清到新离心管中。
8. 加入0.2 mL 的氯fang(自备)，震荡器上充分振荡30 秒混匀。
9. 12000-15000 g 室温离心3 分钟，两相交界面将有白色膜状物，小心转移上清到新离心管中。
10. 重复第7-第8 步操作一次。
11. 加入0.6-1 倍体积的异丙醇(自备)，上下颠倒30 秒混匀，12000-15000g 离心5 分钟，弃上清，管底将有微小DNA沉淀。
12. 用1 mL 70%乙醇清洗沉淀2 次后（一次洗涤是指加入70%乙醇震荡，12000-15000 g 室温离心3 分钟，小心吸弃上清），再短暂离心一次，吸弃残留的液体（约50μL。吸出残留的乙醇很重要，否则它会严重影响后续的电泳上样、酶切、杂交等实验）。
13. 加入50-100 μL 自备缓冲液(如TE)和5-15 μL RNase A 溶液溶解沉淀(由于基因组DNA较大，一般需要过夜溶解)。DNA 即可用于电泳，酶切和PCR 等反应。如果需要测OD，则必须乙醇沉淀去除降解的RNA。
