BTN60205 柱式质粒DNA提取试剂盒说明书

柱式质粒DNA提取试剂盒说明书

产品编号：BTN60205

规格：50T/100T

产品及特点：

本试剂盒是用于质粒DNA 小量制备与纯化的试剂盒。菌体先经碱裂解法处理，再通过离心吸附柱，专一结合DNA，zui后洗去杂质，快速提取质粒DNA，全套操作可以在30分钟之内完成。使用本试剂盒可从1-5 mL过夜培养的菌液纯化得到高达20 μg 的高纯度质粒DNA（OD260/OD280 = 1.8-2.0），可以直接用于酶切、转化、测序及PCR 等。

1. 快速、步骤少，整个操作在半个小时之内完成。

2. 不需要预平衡离心吸附柱。

3. 洗柱液即开即用，不需要额外加乙醇。

4. 纯度高，采用本试剂盒提取的质粒OD 比值在1.8-2.0 之间。

5. 产量高，每毫升过夜培养的细菌可以提取到2-5 μg/mL。

6. 用途广，适用于低拷贝和高拷贝质粒。

7. 价格低，比多数同类产品的价格更。

规格及成分：

保存条件：

常温运输和保存，RNase A 需要-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

1. 先将全部RNase A 溶液全部加入到溶液A 中，摇匀后再取用，未用完的溶液Azui好在4℃保存。

2. 从筛选平板上挑取单菌落至含抗生素的培养基中，37℃震荡培养12-16 小时（摇床转速200-300）。注意：建议使用LB 培养基，营养更丰富的培养基会使菌体浓度过高，超过纯化系统处理能力而降低DNA 质量。另外，延长培养时间有利于提高质粒DNA 浓度，但是菌液培养过长时间会因细胞死亡、裂解而造成质粒DNA 浓度降低。

3. 用1.5 mL 离心管收集1-4 mL 过夜培养饱和菌液，室温12,000 rpm离心1分钟，弃上清，再短暂离心，吸弃残留液体。

4. 加入250 uL溶液A，用枪头充分吹打使菌体重悬（此步在冰上操作效果更佳）。

注意：细胞未充分悬浮会影响后续操作，可以使用漩涡振荡器帮助混匀或使用Tip 吸头吹打沉淀至完全混匀。

5. 加入250 uL 溶液B（如果溶液B 有沉淀，用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用），温和反复颠倒混匀4-6次，看到溶液变粘即可，然后冰上放置不超过4-5分钟。注意：此步处理不能超过5分钟，否则DNA 的碱损伤比较严重。同时千万不要剧烈振荡，否则基因组DNA 断裂产生的片段非常容易污染质粒DNA。溶液B用后需要将盖拧紧存放，否则空气中的二氧化碳会进入溶液，形成碳酸，中和溶液B中的NaOH，降低其效率）。

6. 加入350 uL 冰上预冷的溶液C，反复颠倒混匀4-6 次，可见白色沉淀物产生，然后冰上放置至少5分钟。

7. zui高转速（12,000 rpm 以上）4℃离心5分钟，小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大，有时候出现沉淀漂浮是正常现象，取上清时避开漂浮的沉淀即可。如果此步的离心在室温进行，更容易出现沉淀物漂浮的现象。

8. 静置2分钟以让质粒DNA 与吸附柱充分结合，此步十分重要。

9. 室温12,000 rpm 离心1分钟，弃收集管中的废液。

10. 加入500 uL 的通用洗柱液，室温12,000 rpm 离心1分钟，弃收集管中废液。

注意：通用洗柱液中含乙醇，用后需要将盖拧紧存放，否则乙醇会挥发。

11. 重复上步1 次。

12. 室温12,000 rpm 离心1分钟，甩干残留液体。此步不能省略，否则残留乙醇会影响DNA 的后续使用（如DNA 上样时不能沉淀到加样孔中）。

13. 将离心吸附柱置于一个新的1.5 mL 塑料离心管（自备）中，加入30-100 uL65-80℃预热的DNA 洗脱液2.0，室温放置2分钟。常温的DNA 洗脱液2.0也可以用于洗脱，但产量稍微有所降低。

14. 室温12,000 rpm 离心1分钟，离心管底溶液即质粒DNA。

15. 由于百奥莱博的吸附柱结合DNA 能力较强，如果再加适量DNA 洗脱液2.0 到离心吸附柱中，往往还能洗脱下很多质粒DNA（相当于一次洗脱的20-30%），但注意不要使用上步得到的DNA洗脱液2.0来洗脱。