BTN60106 加T试剂盒说明书

加T试剂盒说明书

产品编号：BTN60106

规格：50T

产品及特点：

本产品利用Taq DNA polymerase 的不依赖于模板的末端转移酶活性，在只有dTTP 存在的情况下，在平末端的DNA 片段加上一个dT尾巴，主要用于制备T载体。

1. 简单, 2X Tailing Buffer 中含有所需要的所有成分,不需要单独准备。

2. 适用于任何平末端的DNA片段，包括Pfu DNA成本polymerase 等酶合成的DNA片段。

3. 加T 后的载体可以作为T 载体使用。

格及成分：

保存条件：

低温运输，-20℃保存，有效期一年。

自备试剂：

平末端DNA片段、平末端质粒DNA。

使用方法：

一：反应前纯化处理：

平末端DNA 片段或平末端质粒DNA 可以采取胶回收和酚/氯fang抽提法等常规方法纯化，zui后溶解在水或TE 中，终浓度以0.1μg/μL 为宜。必须注意的是, 用Vent, Deep Vent, Pfu, Pwo 等具有3 到5 外切活性的DNA 聚合酶扩增得到的DNA 片段，必须经过彻底的去除残留的酶的处理过程（如酚/氯fang抽提或Proteinase K 处理），否则它们将在加T 反应时，切除掉加上的T 尾巴，干扰反应。

二：加T 反应

在干净的0.5 mL 或1.5 mL 离心管中，分别加入下列成分：

回收的DNA片段                          0.2-2μg

2×dT Tailing Buffer                    25μL

Taq DNA polymerase（5 U/μL）           1μL

补水到                                  50μL

72℃保温2 小时

三：反应后处理

加T 反应后，Taq DNA polymerase将与DNA末端紧密结合，所以必须酚/氯fang抽提去除。如果使用Proteinase K处理后再用酚/氯fang抽提效果会更好。得到的DNA溶于适量水和TE中后即可用于后续连接反应。