G载体说明书
产品编号：BTN4610
规格：2μg
产品及特点：
本产品是零背景通用（General）克隆载体,其无背景克隆原理是该载体携带一自杀基因,多克隆位点在该基因之中,自身环化的载体其自杀基因正常表达,转化细胞不能生长。只有当外源DNA 插入片段打断该自杀基因的正常编码顺序,转化细胞才能生长,所以zui后得到的转化子几乎都是含有插入片段的重组子。
1. 零背景,阳性率一般为95%,不用蓝/白筛选,尤其适合于构建文库用。
2. 适用于大部分常用的E.Coli 菌株,而市场上的同类产品一般都需要特殊的菌株作宿主。
3. 克隆步骤简化,可一小时内即可完成。载体无需完全酶切，无需去磷酸化,无需要纯化片段。
4. 多拷贝复制起始位点(ori),便于大量制备质粒。
5. 质粒用量仅为常规方法的1/5。
格及成分：
|
成分 |
规格 |
|
克必隆G 载体DNA |
5μg |
|
选择液,1000× |
1.5ml |
|
说明书 |
1份 |
保存条件：
4℃运输，-20℃保存。
自备试剂：
宿主细菌，LB 培养基。
使用方法：
G 载体的转化和保种
常态转化（需要使用百奥莱博的克必隆常态转化液）
1. 标记无菌的1.5 mL 塑料离心管并加入1 mL 液体培养基（如SOC 或LB）。
2. 用接种环,无菌牙签或吸头从培养皿上挑取1-3 个划盘过夜生长的DH5α，DH10B 或HB101 等常见的E. coli 菌落到无菌离心管中，菌落直径在3-5 mm 之间（如果直径太小，可以适当多挑几个）。用移液枪轻柔吹打散开。如果使用甘油菌种保存液,则直接取50 μL 菌种液到1 mL 培养液中。
3. 37℃保温1小时。
4. 室温10000 g 离心1分钟后小心移弃上清(培养基), 离心速度低于10000 g 则细菌沉淀易丢失。沉淀的细菌约芝麻或麦片大小为宜。
5. 短暂离心, 用移液枪小心将残留的培养液(约50 μL)吸出，否则残留培养基将会严重影响转化效率，故此步一定不能省略。
6. 加入50 μL 冰浴的克必隆转化液并小心将细胞轻柔吹打均匀。
7. 在样品管中加入1-10 μL 克必隆G 载体DNA 并轻柔吹打均匀。
8. 将上述离心管置于-20℃直到液体凝固为止（一般需要20分钟），然后置于冰浴5-10分钟。
9. 在离心管中加入1 mL 无抗菌素的SOC 或LB 培养液，混匀后置37℃水浴保温1小时。
10. 将溶液充分吹打混匀后分别取100 μL 涂于含50 μg/mL Amp 的培养盘上和含50 μg/mL Amp+选择液(1×)的培养盘上，剩余转化zui好留4℃以备再用。
质粒信息：
质粒图谱
克隆位点
