SYBR GreenⅠ,电泳级说明书
产品编号：BTN3280
规格：50μl
产品及特点：
SYBR Green I, EG 是电泳级低毒高灵敏的花青类DNA 荧光染料，适用于各种核酸电泳分析。
1. 低毒安全，其致突变性低于EB 数倍甚至数十倍。
2. 髙灵敏，SYBR Green I 与dsDNA 结合，荧光信号会增强800-1000倍，至少可检出 20 pg DNA，灵敏度高于EB 染色法10－25 倍。
3. 适用范围广，可适用于多种电泳分析，包括琼脂糖凝胶，聚丙烯酰胺凝胶电泳和毛细管电泳等。与百奥的莱博SuperBuffer-2 兼容。
4. 不影响其它修饰酶（Taq 酶、逆转录酶、内切酶、T4 连接酶等）作用。
5. 操作简单，无须脱色或冲洗。
规格及成分：
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成分 |
规格 |
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SYBR Green I, 10000× |
50μl |
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说明书 |
1份 |
保存条件：
常低温运输，-20℃闭光保存， 有效期一年。
自备试剂：
电泳缓冲液（稀释用）。
使用方法：
使用方法之一：电泳前染色
本方法是在上样时对DNA 进行染色，只适于琼脂糖凝胶电泳。
1. 用高纯度的无水DMSO 将10000×的SYBR Green I 稀释100 倍成100×电泳前染色液。染色液可以在-20℃和闭光条件下可以保存一个月以上。
2. 按常规方法制备胶，胶的厚度zui好不要超过5mm，胶中不能含任何染料。
3. 将100 X 电泳前染色液与DNA 样品（包括DNA Marker）按1：10的比例混合，室温放置10-15 分钟，加上样液后上样。
4. 上样后电泳。
5. 在300 nm 的UV 下观察。UV 的功率zui好为90W（15W X 6），手持UV 一般功率不够，难以得到满意的灵敏度。除300 nm 外，SYBR Green I 还可以在500 nm 和380 nm 的激发光下观察（如使用Dark Reader 蓝色可见光透色仪）。也可以用激光扫描仪记录电泳结果。
6. 用配置了520-550 nm 滤光片（一般呈黄色或深黄色）的相机拍照。
注意：不要使用与EB 兼容的红色滤光片（能阻挡520-550 nm 的光）。
如果能再加上能滤去UV 的滤光片，效果会更好。
7. 后续Southern 或Northern 转膜或胶回收按常规操作进行。
使用方法之二：电泳中染色
本方法是将SYBR Green I 加入到琼脂糖凝胶中，优点是不需要额外的染色处理，只适于琼脂糖凝胶电泳。
1. 将10000×SYBR Green I 直接加入到融化的、但温度已经降低到50℃左右的琼脂糖凝胶中，使其终浓度在0.5-1X 左右，混合均匀后倒胶，厚度zui好不要超过5 mm。
2. 按常规方法上样和电泳。
3. 电泳后观察和照相处理同方法一。
注意：由于在琼脂糖凝胶中的SYBR Green I 在加热融化时会大量分解，所以琼脂糖凝胶zui好需要多少配多少。
使用方法之三：电泳后染色
本方法是在电泳后对DNA 进行染色，适用于琼脂糖凝胶电泳和PAGE，检测灵敏度可达20 pg DNA，但该方法需要单独的染色处理。
1. 按照常规方法进行电泳。
2. 用pH 7.0-8.3 的缓冲液（如：TAE，TBE 或TE）将10000×SYBR Green I 稀释10000 倍成1×电泳后染色液。
3. 将电泳后染色液倒入合适的聚丙烯容器中，放入琼脂糖凝胶，用铝箔等盖住容器使染料避光。室温振荡染色10-30 分钟。对聚丙烯酰胺凝胶，可取下一块玻璃板，然后将配好的电泳后染色液轻轻地倒在PAGE 胶板上，让染色液均匀地覆盖整个PAGE 胶板，静置染色30 分钟。避免让染色液与玻璃表面接触。
4. 观察和照相处理同方法一。
注意：电泳后染色液可以冷冻避光储存一个星期。反复使用次数取决于胶的大小（胶越大，非特异吸附产生的损耗就越大），一般可重复使用4次。
注意事项：
1. 融化：本产品溶于DMSO 中, 融化时一定要让其彻底融化，否则SYBRGreen I 在液相和固相中浓度不均，影响实验的可重复性。
2. 容器：SYBR Green I 对聚丙烯材料的亲和力非特意吸附zui小，故建议在稀释、贮存、染色等使用过程中使用专用的聚丙烯类容器，容器表面会被染成橙色。不要使用玻璃和非聚丙烯容器。
3. 反复使用：由于凝胶和容器的非特意吸附，使用过的SYBR Green I 再染色时效率会逐渐降低。
4. 稳定性：稀释后的SYBR Green I 工作液体zui适保存条件是闭光、密封、低温（4℃）、pH 在7.5-8.3。避免将本产品直接加入热的琼脂糖凝胶中，禁止用微波加热处理SYBR Green I。
5. 稀释液：可以用电泳缓冲液稀释SYBR Green I，包括常用的TAE、TBE、TE、SuperBuffer-2 等。zui好不要使用水和pH 7.8（25℃）的Tris 缓冲液。后者的pH 在4℃时会升高到8.4。
6. 其他影响因素：染色液中zui好不要有SDS，也不要用去污剂洗涤染色用的聚丙烯容器时，0.1-.3% SDS 能抑制SYBR Green I 与DNA 结合。用deaza-G 替代G 的DNA 不能有效染色。
疑难解答：
Q：DNA 条带为何出现弯曲或模糊？
A：DNA 过量，将DNA 用量降低到1-5 ng/条带。电泳时间不要超过2 小时，否则SYBR Green I 会从DNA 上分离出来，会产生弥散状条带。电压不能太高，否则产热会影响SYBR Green I 与DNA 的结合。
Q：醇/盐沉淀法能否把结合在DNA 上的SYBR Green I 去掉？
A：可以。其中乙醇效果zui好，异丙醇次之。但正丁醇、氯fang和苯酚抽提不能去除与DNA 结合的SYBR Green I。
Q：用SYBR Green I 染过的胶能否用于Southern 或Northern Blot？
A：可以，但zui好在预杂交和杂交溶液中加入0.1%-0.3%的SDS。SDS 能是SYBR Green I 与DNA 分开。
Q：能否用SYBR Green I 染色膜上的DNA。
A：可以用来染色带正电的尼龙膜上的DNA，不能用于中性尼龙膜和硝酸纤维素膜。
