1、检验技师应具备从事实验室操作的基本素质和实践经验。
2、操作前仔细阅读说明书,严格按照说明书要求进行规范化操作。
3、评估试剂盒的实用性,试剂盒的稳定与否,对准确率的高低很重要。
4、加样要准确、快速。
5、使用校对过的微量移液器,排除自然误差。
6、严格掌握显色时间,显色时间过短,加入终止液反应终止后,底物结合物的量过少,易出现假阴性。
7、洗涤彻底,洗板不彻底,酶结合物本底显色会呈现假阳性。
8、严控反应时间,反应时间过长,酶失活,反应时间过短,酶结合物不能与血清中的微生物抗原抗体充分结合,生成物结构松散不牢固,容易洗掉,都可能造成假阴性。
实验过程必知小知识:
① 建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测,取平均值,以减小实验误差。
② 若显色过浅,可适当延长底物温育时。
③ 实验严格按照说明书的操作进行,实验结果判定必须以酶标仪读数为准。
④ 酶标包被板开封后如未用完,应立即装入密封袋中加干燥剂保存。
⑤ 标本宜在新鲜时检测,如有细菌污染,菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应,保存过久可发生聚合在ELISA中可使本底加深。
⑥ 冻结标本溶解后,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混匀宜轻缓,避免气泡,可上下颠混合,不要在混匀器上强烈震荡。
⑦ 浑浊或有沉淀的标本应先离心或过滤,澄清后再检测。
⑧ 反复冻融会使蛋白效价降低,所以代测样本如需保存作多次检测,宜少量分装冰存。
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