1.即将进行试验的版孔进行设定好，规范品5个点，每个点设定平行，需求用到10个孔，空白只需1个孔。剩下孔能够做为样本孔
2.稀释规范，准备好5个EP管，然后在每个EP管中参加150微升规范稀释液，编上编码，分别为1，2，3，4,5，在1号管中参加150规范品，用枪头重复吹打10次左右（留意操控起伏不要过大简单发生气泡）如果有涡旋仪能够在涡旋仪上涡旋5秒左右，然后换枪头，在1号管中取150微升参加到2号管，后面进程一次类推。终稀释完，前面4个管中每管液体在150微升，5号管为300微升。浓度是从大到小。
3.规范、样本、空白加样：规范是每个浓度点2个孔（做平行），每孔参加50微升，加样进程中留意换枪头，样本孔中每孔参加50微升，加样进程中留意换枪头，空白孔参加50微升蒸馏水。特别要阐明的是，规范加样和样本加样尽量操控在15分钟内加完，如果时刻拖的太长，会导致前面孔先反响后面孔才开端反响，这样数值误差过大。加完样后盖上封板膜，至37摄氏度孵育30分钟.
4.洗版，在孵育进程中能够将洗涤液配好，20ml30倍浓缩洗涤液用蒸馏水或许去离子水定容到600ml即可。每孔参加250-300微升的洗涤液（不要漫过版孔），（如果有震动仪的话，能够讲板子放入震动仪上5秒左右，然后静止三十秒，没有请疏忽次进程）将板子在桌子上晃动5秒左右，然后静置30秒，甩干，决定。阐明：甩干进程尽量要快，1秒内就能够完结，不要渐渐歪斜倒掉液体，直接翻板甩掉液体即可。决定进程需求在桌子上垫一层吸水纸或许滤纸，版孔朝下拍几下，拍干差异主要看吸水纸和滤纸上没有显着的水渍为完结。
5.每孔参加50微升的酶标试剂，此处在空白孔中不需求加（空白孔为空），孵育30分钟。
6.洗版同进程4
7.显色，先每孔中参加50微升的显色A液，然后每孔中参加50微升显色B液。避光37摄氏度显色15分钟
8.停止，每孔参加50微升的停止液，留意，加完停止液必须在15分钟内读数，超越时刻读数无效。在规则时刻内读数都是有用的。
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