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大鼠甲状腺过氧化物酶试剂盒实验的具体步骤

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  • 更新日期:2017-11-06 11:32
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大鼠甲状腺过氧化物酶试剂盒实验的具体步骤:
(1)ELISA试剂盒将抗原抗体反应固相化:即试验中的包被环节,使抗原或抗体吸附于固相载体表面。其机制可能是聚苯乙烯表面间的疏水基团可以无选择性地吸附蛋白分子。此物理性吸附不破坏蛋白分子结构,保持其生物学特性和免疫学活性;
(2)封闭:固相吸附蛋白是非特异性的,在包被目的免疫蛋白后,未吸附蛋白的固相表面仍然有吸附其它蛋白的能力,为了保障抗原抗体反应的特异性,因此,包被剩余的固相表面应该用抗原抗体反应无关蛋白封闭。一般认为牛血清白蛋白是为理想的封闭剂,也可用脱脂奶粉、明胶、牛血清替代。
(3)抗原抗体反应:抗原或抗体在适当的介质下可进行特异的抗原抗体反应。
(4)酶反应:酶可以通过共价键与抗原或抗体连接形成结合物,当抗原抗体反应的时候,被检测靶目标中也结合了酶分子。
(5)底物反应:结合在抗原抗体中的酶分子,可以促使底物发生颜色反应,检测人员可以裸眼观察,可以通过颜色来判定是否有免疫反应的存在,通过颜色的深浅判断标本中相应抗原或抗体的含量,也可借用酶标仪在适当的波长读取吸光度值。
检测原理: 
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人IL-22抗体包被于酶标板上,实验时样品或标准品中
的人IL-22会与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人IL-22抗体和辣根过
氧化物酶标记的亲和素。抗人IL-22抗体与结合在包被抗体上的人IL-22结合、生物素与亲和素特
异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶
的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,IL-22浓度与OD450
值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中IL-22的浓度。 
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人脱氧核糖核酸酶Ⅰ(DNase-Ⅰ)免疫试剂盒 Human deoxyribonuclease Ⅰ,DNase-Ⅰ ELISA Kit
人脱氧吡啶酚/脱氧吡啶啉(DPD)免疫试剂盒 Human deoxypyridinoline,DPD ELISA Kit
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