elisa酶联免疫试剂盒双抗体夹心法

elisa酶联免疫试剂盒双抗体夹心法
1. 包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。（简称洗涤，下同）。
2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。
3. 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。
4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。
5. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
测定步骤
使用前将所有IL-6ELISA试剂盒和样本平衡至室温。推荐所有的样本、标准和对照测定双份。
1. 准备所有的试剂和工作标准品。
2. 取下多余的微量培养板条，放回装有干燥剂的锡箔袋中，重新密封。
3. 每孔加入100ul Assay Diluent RD1W。
4. 每孔依次加入100ul 标准品、样本和对照。用橡皮条密封。室温孵化2小时。记录测定标准和样本的分布。
5. 吸弃孔内液体，每孔400ul洗涤液，充分洗涤后完全去除液体。在干净的纸上拍干。反复洗涤4次。
6. 每孔加入200ul IL-6 Conjugate。用新的橡皮膏条密封。室温温浴2小时。
7. 重复步骤5。
应用双抗体夹心法测定标本中白介素6(IL-6)水平。用纯化的白介素6(IL-6)抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入白介素6(IL-6)，再与HRP标记的白介素6(IL-6)抗原结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的白介素6(IL-6)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中白介素6(IL-6)浓度。
 T4 人甲状腺素 规格： 48T/96T
 TG 人甲状腺球蛋白 规格： 48T/96T
 TAb 人甲状腺抗体 规格： 48T/96T
 TBG 人甲状腺结合球蛋白 规格： 48T/96T
 TPO 人甲状腺过氧化物酶 规格： 48T/96T
 THAA 人甲状腺非肽激素抗体 规格： 48T/96T
 TSI 人甲状腺刺激免疫球蛋白 规格： 48T/96T
 PTHrP 人甲状旁腺激素相关蛋白 规格： 48T/96T
 PTH 人甲状旁腺激素 规格： 48T/96T
 AFP 人甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白 规格： 48T/96T
 fMet 人甲酰甲硫氨酸 规格： 48T/96T
 PGD2-MOX 人甲肟前列腺素D2 规格： 48T/96T
 Methylase 人甲基化酶 规格： 48T/96T
 MTX 人甲胺喋呤 规格： 48T/96T
 PV-IgG 人脊髓灰质炎病毒IgG 规格： 48T/96T
 CSF 人集落刺激因子 规格： 48T/96T
 VLDLR 人低密度脂蛋白受体 规格： 48T/96T
 KLK 8 人激肽释放酶8 规格： 48T/96T
 KLK 6 人激肽释放酶6 规格： 48T/96T
 KLK 11 人激肽释放酶11 规格： 48T/96T
 KLK 10 人激肽释放酶10 规格： 48T/96T
 KLK 1 人激肽释放酶1 规格： 48T/96T
 CKMB 人激动异构酶/细胞分裂素MB 规格： 48T/96T
 SDF-1β/CXCL12 人基质细胞衍生因子1β 规格： 48T/96T
 SDF-1a/CXCL12 人基质细胞衍生因子1a 规格： 48T/96T
 ST3 人基质裂解素 规格： 48T/96T
 ST2 人基质裂解素 规格： 48T/96T
 ST1 人基质裂解素 规格： 48T/96T
 MAT 人基质裂解蛋白 规格： 48T/96T
 TIMP-1 人基质金属蛋白酶组织抑制因子1 规格： 48T/96T
 TIMP-4 人基质金属蛋白酶抑制因子4 规格： 48T/96T
 TIMP-3 人基质金属蛋白酶抑制因子3 规格： 48T/96T
 TIMP-2 人基质金属蛋白酶抑制因子2 规格： 48T/96T
 TIMP-1 人基质金属蛋白酶抑制因子1 规格： 48T/96T
 MMP-9/Gelatinase B 人基质金属蛋白酶9/明胶酶B 规格： 48T/96T
 MMP-8 人基质金属蛋白酶8/中性粒细胞胶原酶 规格： 48T/96T
 MMP-7 人基质金属蛋白酶7 规格： 48T/96T
 MMP-5 人基质金属蛋白酶5 规格： 48T/96T
 MMP-4 人基质金属蛋白酶4 规格： 48T/96T