KFS159 线粒体绿色荧光探针说明书

线粒体绿色荧光探针——MitoGreen

Cat number：KFS159

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For Research Use only

一、产品描述

具有细胞膜渗透性的 MitoGreen（分子量 671.8）探针包含一个温和的巯基反应性氯甲基基团，可用于标记线粒体，并在固定之后保留在线粒体内。标记线粒体，细胞可以与 Mito-green 探针简单孵育，探针通过被动扩散传过质膜，并在有活性的线粒体内富集。一旦线粒体被标记，细胞再用醛基类固定剂固定之后，就可以进一步做下游实验的深入处理。这些 Mito-Green 染料可以解决一些致病性细胞上研究所面临的困难，因为标记线粒体可以在细胞被固定之前开展。

虽然传统的荧光染料，如四甲基罗丹明和罗丹明 123，很容易识别功能性线粒体，但是这些染料一旦在线粒体去化时也很容易被洗涤出线粒体。这些缺点限制了常规染色实验中所用的醛类固定剂，以及一些实验用的处理药品的选择。而本染料可以很好的解决这一问题。

注意：本探针不适用于用乙醛固定的组织和细胞。

MitoGreen probe：Ex/Em=490nm⁄516nm

二、产品包装

三、操作说明

细胞制备与染色

的染色探针浓度取决于不同的应用程序类型，此处建议的初始条件是基于验证的特定细胞类型，具体实验中应摸索加以调整。

1.1 准备染色：本试剂盒提供的 MitoGreen 大约为 0.5mM，用前，以HBSS 或不含血清、酚红的培养

基稀释 MitoGreen 原液至工作液浓度。(一般来说，活细胞标记，探针工作浓度为 25~500nM，如果

是固定的细胞，浓度一般为100~500nM，为减少可能的线粒体毒性超负荷，选择尽可能低的染料浓

度) 。

对于 96 孔培养板中的细胞样品而言，每孔染色工作液体积 100μL 足够标记，本试剂盒可以提供至少

1000 次测试；对于 6 孔板培养的细胞样品，每孔染色工作液体积 1ml 足够标记，本试剂盒至少可以

提供 100 次测试。

1.2 染色贴壁细胞：1.1步准备的预热染色液，37度孵育15~45分钟。完成染色后，更换新鲜预热的培养基 

或缓冲液，用荧光显微镜或者荧光酶标仪观察细胞。如是固定细胞，继续染色后固定和通透处理。

1.3 染色悬浮细胞：离心细胞，弃上清，用预热的 1.1 步配制的染色液悬浮细胞，37 度孵育 15~45 分

钟。完成染色后，更换新鲜预热的培养基或缓冲液，用流式细胞仪或者荧光微孔板读数仪、或者荧光显

微镜进行分析。如需固定细胞：用多聚-D-赖氨酸处理的载玻片，继续染色后的固定和通透处理。

可选步骤：染色后的固定和通透

2.1 洗涤细胞：染色完成后，用预热的新鲜培养基或缓冲液洗涤细胞。

2.2 固定细胞：小心出去培养基或者缓冲液，用新鲜配制预热的含 2~4%甲醛的培养基替代。

2.3 洗涤细胞：固定完成后，缓冲液洗涤多次。

2.4 通透处理（可选）：可选择 Triton X-100 去污剂通透，如内皮细胞用含有 0.2%的 Triton X-100-PBS 

孵育 10 分钟，或者在冰冷的丙酮中浸泡 5 分钟，再以 PBS 洗涤。