线粒体绿色荧光探针——Mito tracker Green
Cat number：KFS157
Store at -20℃ for 24 months，避光
For Research Use o
一、产品描述
具有细胞膜渗透性的 Mito-tracker Green（分子量 671.8）探针包含一个温和的巯基反应性氯甲基基团，可用于标记线粒体，并在固定之后保留在线粒体内。标记线粒体，细胞可以与探针简单孵育，探针通过被动扩散传过质膜，并在有活性的线粒体内富集。一旦线粒体被标记，细胞再用醛基类固定剂固定之后，就可以进一步做下游实验的深入处理。本探针染料可以解决一些致病性细胞上研究所面临的困难，因为标记线粒体可以在细胞被固定之前开展。
虽然传统的荧光染料，如四甲基罗丹明和罗丹明 123，很容易识别功能性线粒体，但是这些染料一旦在线粒体去化时也很容易被洗涤出线粒体。这些缺点限制了常规染色实验中所用的醛类固定剂，以及一些实验用的处理药品的选择。而本染料可以很好的解决这一问题。
注意本染料不适用于乙醛固定后的细胞和组织。
Mito Tracker Green probe：Ex/Em=490nm⁄516nm
二、产品包装
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组份 |
KFS157 |
储存条件 |
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线粒体绿色荧光探针 Mito tracker Green |
50μg |
-20℃，避光 |
注意：可用744μl无水DMSO溶解50μg染料探针，所得1mM储液分装避光可保存12 个月
三、操作说明
细胞制备与染色
的染色探针浓度取决于不同的应用程序类型，此处建议的初始条件是基于验证的特定细胞类型，具体实验中应摸索加以调整。
1.1 准备染色：1mM 储液用之前，以 HBSS 或不含血清、酚红的培养基稀释至工作液浓度。（一般
来说，活细胞标记，探针工作浓度为 25~100nM，如果是固定的细胞，浓度一般为 100~200nM，为了减少可能的线粒体毒性超负荷，选择尽可能低的染料浓度。）对于 96 孔培养板中的细胞样品而言，每孔染色工作液体积 20μL 足够标记。
1.2 染色贴壁细胞：以 1.1 步准备的预热染色液，37 度孵育 30~120 分钟。完成染色后，更换新鲜
预热的培养基或缓冲液，用荧光显微镜或者荧光酶标仪观察细胞。如是固定细胞，继续染色后的固定和通透处理。
1.3 染色悬浮细胞：离心细胞，弃上清，用预热的 1.1 步配制的染色液悬浮细胞，37 度孵育
30~120 分钟。完成染色后，更换新鲜预热的培养基或缓冲液，用流式细胞仪或者荧光微孔板读
数仪、或者荧光显微镜进行分析。如需固定细胞：用多聚-D-赖氨酸处理的载玻片，继续染色后的
固定和通透处理。
可选步骤：染色后的固定和通透
2.1 洗涤细胞：染色完成后，用预热的新鲜培养基或缓冲液洗涤细胞。
2.2 固定细胞：小心出去培养基或者缓冲液，用新鲜配制预热的含 2~4%甲醛的培养基替代。
2.3 洗涤细胞：固定完成后，缓冲液洗涤多次。
2.4 通透处理（可选）：可选择 Triton X-100 去污剂通透，如内皮细胞用含有 0.2%的 Triton X-100-
PBS 孵育 10 分钟，或者在冰冷的丙酮中浸泡 5 分钟，再以 PBS 洗涤。
