KFS156 活细胞荧光示踪探针说明书

活细胞荧光示踪探针 CDCFDA, SE

Cat number：KFS156

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For Research Use only

一、产品描述

活细胞荧光示踪探针 CDCFDA, SE [5-(and-6)-Carboxy-2’,7’-dichlorofluorescein diacetate, succinimidyl ester]已被广泛证实，用CDCFDA 活细胞绿色荧光探针标记细胞能有效确定总细胞的数量和一个样本中存在多少活细胞。流式细胞术结合荧光染色法是分析非均质细胞种群的有力工具。

FDA 和它的衍生物无荧光分子进入细胞后被胞内无特异性的酯酶所水解产生荧光。这些荧光产物只能积聚在具有完整细胞膜的细胞中。因此，死细胞无完整细胞膜不能被染色。FDA 具备地膜转运动力学和胞内水解作用或者类似物（CDCFDA）相关的细胞功能，因此可以通过荧光显微镜或者流式细胞仪来检测 FDA 标记的细胞。过 FDA 荧光标记的细胞在细胞系或者菌株中存在变化，可能是由于不同胞内酯酶的活性所造成的。活细胞荧光示踪探针 CDCFDA, 琥珀酰亚胺酯是一个胺化 FDA 衍生物，可以用来制备各种 FDA偶联物。

CDCFDA,SE（MW：626.35）是细胞示踪以及检测细胞活力的工作。

CDCFDA 光谱特性

二、产品包装

三、操作说明

细胞制备与染色

的染色探针浓度取决于不同的应用程序类型，此处建议的初始条件是基于验证的特定细胞类型，具体实验中应摸索加以调整。测试建议至少十倍的浓度范围内。一般情况下，长期染色（3 天以上）或者快速分裂的细胞使用需要 5~25μM 的染料。更短的实验，如生存能力分析，可以采用 0.5~5μM。为了减少毒性负荷，选择尽可能低的染料浓度。

1.1 用高品质 DMSO 溶解染料至终浓度为 10mM 储液，储液添加至无血清培养基中，保持终浓度

在 0.5~25μM 的工作浓度，孵育温度为 37 度。

1.2 对于悬浮细胞，当细胞浓度达到所需要求，即可离心收集细胞，弃上清，用预热的染色轻柔重

悬，在细胞的生长条件下孵育 15~45分钟后，离心。对于贴壁细胞，当达到合适汇合度后，去掉培养基，更换以预热的染色液，在细胞的生长条件下孵育 15~45 分钟。

1.3 更换新鲜预热的培养基，37 度另外孵育 30 分钟，以保证胞内酯酶充分水解。

1.4 吸取 5μL 的染色菌液至载玻片上，加盖 18mm 正方形盖玻片，荧光显微镜观察。

1.5 如需进行流式细胞术分析，可以收集细胞，调整细胞密度在 10⁶/mL，按悬浮细胞孵育标记方法之

后，上流式细胞仪进行分析。