细胞膜红色荧光染料 DiD
Cat number：KFS152
Store at -20℃ for 12 mo
For Research Use o
一、产品描述
长链二烷基羰花青化合物，特别是 Dil，广泛应用于固定和非固定的组织与细胞中，进行顺行或逆行的神经示踪分析。Dil 不会影响细胞的活力、生长以及基本生理特性。
Dil 标记运动神经元，可在培养基条件下持续跟踪长达四周，在体内长达一年。染料通过在质膜中的缓慢横向扩散均匀标记神经元，0.2~0.6mm/每天/固定标本，在活体组织里，可以达到 6mm/每天。经过醛固定的组织，Dil 的扩增可以持续长达 1~2 年。一般情况下未标记的染料不会向非标记的细胞转移，除非质膜被破坏，比如切片部位。DiD(MW:959.91)
光谱特性
DiO, DiI, DiD, and DiR 结合磷脂双分子层的标准发射光谱图。
二、产品包装
|
组份 |
KFS152 |
储存条件 |
|
细胞膜红色荧光染料 DiD（100mM in DMSO） |
10mg，110μL |
-20℃，避光 |
三、操作说明
制备储液
高浓度储液染料以DMSO溶解配制为1mM储液。一旦制成的储液，需避光冷冻，储液可保存6个月。
标记悬浮细胞
1.1 以无血清培养基悬浮细胞密度为 1X106 个/mL。
1.2 每 1mL 细胞悬液加入 5μL 细胞标记液，混匀。
1.3 37 度孵育 1~20 分钟。不同的细胞类型所用的孵育条件不一样，可参考表格 1.初始孵育时间可选择
20 分钟，随后再进行优化。
1.4 37 度，1500rpm 5 分钟离心标记悬浮液。
1.5 去上清，用 37 度的培养基轻轻悬浮细胞。
1.6 重复两次以上的洗涤步骤。
1.7 放置 10 分钟后进行荧光测量。
标记贴壁细胞
2.1 培养细胞至所需的汇合度。
2.2 取出爬片，吸去培养基，放到盖玻片湿盒中。
2.3 准备标记，每 1mL 新鲜培养基中加入 5μL 的标记液。
2.4 吸取 100μL 盖玻片周围的染色介质，轻轻铺匀，使之盖满整个爬片。
2.5 37 度孵育细胞，不同的细胞类型所用的孵育条件不一样，可参考表格 1.初始孵育时间可选择 20 分
钟，随后再进行优化。
2.6 去掉染色介质，用新鲜预热的培养基孵育 10 分钟，再更换以新的预热的培养基孵育 10 分钟，重
复洗涤盖玻片三次。
|
Cell Line |
Optimal incubation time |
|
Jurkat |
2 minutes |
|
HeLa |
8 minutes |
|
P3X |
15 minutes |
|
3T3 |
15 minutes |
表1. 优化的细胞染色孵育时间
|
Tracer |
Ex |
Em |
Optical Filters |
|
|
|
（nm） |
（nm） |
Omega |
Chroma |
|
DiO |
484 |
501 |
XF23 |
31001 |
|
DiI |
549 |
565 |
XF32 |
31002 |
|
DiD |
644 |
665 |
XF47 |
31023 |
|
DiR |
750 |
780 |
XF112 |
41009 |
表2.DiO, DiI, DiD and DiR 光谱特性
