小鼠总前列腺特异抗原(tPSA)ELISA试剂盒使用说明书

1. 取出试剂盒，室温（20-25℃）放置 30 分钟。

2. 分组：取出 96 孔板，根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数，把剩余的板条继续冷藏处理。分别设标准品组（6 个浓度）、空白孔、待测样品组。

标准品的稀释：准备小试管6 只，依次编好号码，先在各小试管中加入标准品稀释液100ul，然后取原浓度标准品100ul 加入一只已编好号的试管中，充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第二支试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul 加入第三只

试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul 加入第四只试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul 加入第五只试管中，充分混匀；然后在该试管中取100ul，弃掉。第六只试管作为0 号标准品。稀释后各管浓度分别是：2400μg/L,1200μg/L,600μg/L,300μg/L,150μg/L ,0μg/L。注：为减少实验误差，保证准确性，建议设置复孔。

3. 加样：依照标准品的顺序分别加入 50ul 的标准品溶液于空白微孔中；空白对照孔加入 50ul 的蒸馏水；其余微孔中先加样品 40ul 然后再加生物素标记的抗 CRP 抗体 10ul。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

4.温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。

6. 加酶标溶液：标准品组、待测样本组各孔中加入 50ul 的酶标溶液（空白对照孔除外）。

7. 温育：酶标板用封板纸密封后，放入湿盒内于 37℃恒温孵育 1 小时。

8. 洗板：用稀释后的洗涤液注满每孔，静置 15-30s，充分清洗酶标板 5 次，用吸水纸彻底拍干。

9. 显色：各孔加入显色剂 A 液 50ul 后，再加入显色剂 B 液 50ul。

10. 终止：25-37℃下避光反应 10-15 分钟，加入 50ul 终止液。

11. 读板：在 450nm 波长读取各孔的 OD 值。