小鼠热休克蛋白70(HSP70)ELISA试剂盒使用说明书

1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

32ng/L    5号标准品    150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

16ng/L    4号标准品    150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液

8ng/L    3号标准品    150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液

4ng/L    2号标准品    150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液

2ng/L    1号标准品    150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.

10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 小鼠热休克蛋白70(HSP70)ELISA试剂盒测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。