本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平。用纯化的人基质金属蛋白酶-9(MMP-9)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入基质金属蛋白酶-9(MMP-9),再与HRP标记的MMP-9抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的基质金属蛋白酶-9(MMP-9)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人基质金属蛋白酶-9(MMP-9)浓度。
样本处理及要求:
1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
7. 人基质金属蛋白酶-9(MMP-9)ELISA试剂盒不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
(3-氯丙基)三甲氧基硅烷 2-甲基环己醇 乙烯基三乙氧基硅烷
1,3-二氯四甲基二硅氧烷 3,5-二氯硝基苯 叔丁基二甲基氯硅烷
氯乙烷 3-(4-甲氧基苯甲酰基)丙酸 四甲氧基硅烷;原硅酸四甲酯
反-1,2-环己二胺 丙酰溴 三苯基氯硅烷
(3-巯基丙基)三甲氧基硅烷 氨噻肟酸乙酯 二甲基二乙氧基硅烷
4-甲氧基氯化三苯甲烷 2-氟-6-甲氧基苯胺 甲基三乙氧基硅烷
1,10-二氨基癸烷 2,4-二溴氟苯 甲基三氯硅烷
1,7-二氨基庚烷 1,2-O-异亚丙基-D-呋喃葡萄糖 三甲基氯硅烷
1,12-二氨基十二烷 溴氟乙酸乙酯 二甲基二氯硅烷
二苯甲酰甲烷 4-溴乙酰乙酸乙酯 1,3-二溴丙烷
二叔戊酰甲烷 4,5-二溴-2-糠酸 溴代正戊基
二甲基苯基硅烷 对甲酰基肉桂酸甲酯 溴代十四烷
正辛基三氯硅烷 2-苯基苯并咪唑 氯代叔丁烷
人基质金属蛋白酶-9(MMP-9)ELISA试剂盒
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