兔抗体免疫组化 SP 试剂盒操作步骤说明书_应用方法_资料

百奥莱博兔抗体免疫组化 SP 试剂盒（DAB, RABBIT）

Cat number：KFS033

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For Research Use Only

一、 试剂盒说明

适用于免疫组化方法的石蜡包埋、冰冻切片、培养细胞涂片及血液标本。

二、试剂盒组份

三、试剂盒以外自备仪器和试剂

1、二甲苯、乙醇、无水甲醇

2、蒸馏水或去离子水

3、30％ H₂O₂

4、10 mM PBS, pH 7.4 或 50mM TBS, pH 7.8 5、一抗（兔抗体）

6、苏木精染液

7、封片胶

8、显微镜

四、使用注意事项

1、检测标本时需同时做阴性对照和阳性对照。

2、DAB 是一潜在致癌物，使用时请注意自我防护。

3、DAB 显色液需现用现配，避光放置，且在 30 分钟内染色。

4、用滴瓶加液时，每一滴的体积为 50μL。

五、推荐染色步骤：（以石蜡切片为例）

1、标本制备

石蜡切片用二甲苯常规脱蜡、入水、抗原修复（可根据一抗说明书推荐方法进行操作）。染色前用 PBS 浸泡组织或细胞涂片 10 分钟。（注意：从此步骤起，严禁标本或组织切片干燥）

2、染色

1）石蜡切片放入 3％H₂O₂-甲醇液中浸泡 10 分钟，以消除内源性过氧化氢酶的作用。

2）用 PBS 洗 2 分钟/次×3 次。

3）加一滴试剂 A 于组织切片上（需完全覆盖待检组织）孵育 10 分钟。

4）倒掉或吸干液体（不要冲洗）。

5）每张切片加二滴(100μL)或适量一抗(需完全覆盖待检组织)，湿盒内孵育 30～60 分钟。6）用 PBS 洗 2 分钟/次×3 次。

7）每张切片加一滴试剂 B（需完全覆盖待检组织），孵育 10 分钟。

8）用 PBS 洗 2 分钟/次×3次。

9）每张切片加一滴试剂 C（需完全覆盖待检组织），孵育 10 分钟。

10）用 PBS 洗 2 分钟/次×3 次。

11）制备 DAB 显色液（需现用现配；以染一张切片为例；可根据需要一次染多张切片，

具体用量见下表）

① 取 2.5μL 试剂 D 加入到 50μL 蒸馏水中，混匀。

② 取 2.5μL 试剂 E、2.5μL 试剂 F 加入①中，混匀。

配制 DAB 显色液所需试剂 D、E、F 用量表

12） 每张切片加一滴上述 DAB 显色液，室温显色 2～5 分钟（可在镜下掌握显色程度）。

13）自来水充分冲洗。

14）复染，盐酸酒精分化。

15）脱水、透明、封片、镜检。

3、结果阳性结果为在抗原定位处染棕黄或棕褐色。