Oct-4 免疫荧光试剂盒说明书

产品编号：KFS019

储存条件：2-8℃，避光，有效期 6 个月

For Research Use Only

一、试剂盒说明

本试剂盒可用于免疫荧光方法以显示人、大、小鼠来源的组织样本Oct-4抗原的分布。本试剂盒适用于常规福尔马林固定石蜡包埋切片、冰冻切片、培养固定的细胞爬片等。

二、试剂盒组份

备注：抗体在 2-8℃可以保存 6 个月，长期保存可以分装保存于-20℃。

三、试剂盒以外自备试剂和仪器

二甲苯、乙醇、蒸馏水或去离子水、甲醇、10%山羊血清封闭液、10 mM PBS（pH 7.4）、免疫组化笔、荧光防淬灭封片胶、显微镜。

四、使用注意事项

1. 检测标本时需同时做阴性对照和阳性对照。

2. 在超过有效期的试剂盒中一种或多种试剂的活性可能降低，因此不得使用过期的试剂盒，不同批号间试剂盒也不能交叉混用。

五、推荐操作方法（以石蜡切片为例）

1. 石蜡切片二甲苯脱蜡、梯度酒精水化，用PBS(pH7.4)冲洗三次，每次3分钟（3x3min）。    

（注意：从此步骤起，严禁标本或组织切片干燥）。

2. 抗原修复（选做步骤：石蜡组织切片建议进行蛋白酶K修复20ug/ml，37℃，30min）。

3. 除去PBS液，每片加50~100μl的10%山羊血清封闭液（自备），湿盒内室温或37度孵育

30分钟。PBS洗涤3× 2min。

4. 除去PBS液，每张切片加50~100μl的Oct-4兔多抗(用户根据实验需要进行自选，用量体积

按完全覆盖组织为准，建议抗体稀释比例为：固定细胞1:100-500；冰冻切片1:100-500；石蜡切片1:50-200)，湿盒内室温（或37度）孵育60分钟或4℃过夜。PBS洗涤3×2min。

5. 除去PBS液，每张切片加50~100μl荧光标记二抗工作液（体积用量按完全覆盖组织为准，

FITC标记羊抗兔IgG，PBS稀释抗体1:50~1:200）。PBS洗涤3×2min。

6. 除去PBS液，以甲醇稀释20×DAPI溶液至1×，每片加50~100μl避光染色10~15min。

7. PBS洗涤2次，以甘油明胶（60%甘油-PBS）或者防淬灭封片胶封片，在荧光显微镜下观察拍照。

六、可能出现的问题及解决办法

1. 脱蜡不彻底，容易出现非特异性背景染色，建议免疫组化切片脱蜡与常规HE脱蜡分开。

2. 操作过程中冲洗不充分，容易出现非特异性背景染色，需严格控制冲洗时间与次数。

3. 为防止可能出现的假阳性、假阴性结果，建议在实验过程设置阳性与阴性对照。

4. 操作中滴加试剂时缓冲液PBS未沥干致使试剂稀释，将引起染色强度变弱或假阴性发生。因此，每步滴加试剂前应将组织片上的PBS液除干，但又必须预防干片。