Cat number：KFS005
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For Research Use Only
一、试剂盒说明
本通用型强力抗原修复液的抗原修复效果总体上要优于常用的柠檬酸钠抗原修复液。细胞或组织用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后，会导致蛋白之间的交联(cross-link)，从而遮蔽样品的抗原位点，导致免疫染色时染色信号减弱，甚至出现一些假阳性染色结果。
本抗原修复液采用了可以直接逆转醛类固定试剂交联作用的试剂，可以非常有效地去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联，充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位，从而大大改善免疫染色效果。
通常石蜡切片都需进行抗原修复处理，而冰冻切片可以不进行抗原修复处理。抗原修复会大大改善石蜡切片的免疫染色效果，但对于冰冻切片的染色效果很多文献资料表明也有显著改善。特别是当冰冻切片免疫染色效果欠佳时，可以考虑尝试进行抗原修复。从原理上来看，无论冰冻切片还是细胞爬片等，只要是用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定的样品，进行抗原修复都会有效去除蛋白之间的交联，充分暴露抗原表位，从而大大改善免疫染色效果。本产品对石蜡切片、冰冻切片、细胞爬片或涂片等样品均适用。
一个包装的本产品可以配制成 1000 毫升抗原修复液(1X)。按照每个片子需要 10 毫升抗原修复液(1X)计算，一个包装的本产品可以用于 100 个样品。
二、试剂盒组份
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组分 |
KFS005 |
储存条件 |
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通用型强力抗原修复液(10X) |
100mL |
4℃或-20℃ |
三、使用注意事项
抗原修复过程可使用染色缸和染色架或邮寄夹进行操作。塑料染色缸、染色架和邮寄夹可以很好地耐受沸水浴，而玻璃染色缸需避免骤冷骤热导致的玻璃破碎。
抗原修复液使用前必须用重蒸水或 MilliQ 水稀释 10 倍，配制成抗原修复液(1X)。
通用型强力抗原修复液(10X)含有低浓度的有毒试剂，请注意小心防护。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
四、操作方法
1. 对于石蜡切片：
a. 脱蜡：切片在二甲苯中脱蜡 5 分钟，再换用新鲜的二甲苯脱蜡，共用二甲苯脱蜡 3 次。无水乙醇 5 分钟，两次。90%乙醇 5 分钟，两次，70％乙醇 5 分钟，一次。蒸馏水 5 分钟，两次。
b. 抗原修复：将切片浸泡在抗原修复液(1X)中，95-100℃加热约 20 分钟(加热时间可以控制在 10-30 分钟内，的加热时间需根据不同的样品和目的蛋白自行摸索)。抗原修复液(1X)使用前需预热到 95-100℃。加热可以使用普通的水浴锅，也可以使用微波炉加热。如果使用微波炉加热，需注意避免暴沸和过多的水分蒸发。随后大约在 20-30 分钟内冷却至室温。用免疫染色洗涤液洗涤 1-2 次，每次 3-5 分钟。随后即可进行封闭等后续的免疫染色步骤。
c.
2. 对于冰冻切片：
用免疫染色洗涤液洗涤切片 5 分钟。将切片浸泡在抗原修复液(1X)中，95-100℃加热约 20 分钟(加热时间可以控制在 10-30 分钟内，加热时间需根据不同的样品和目的蛋白自行摸索)。抗原修复液(1X)使用前需预热到 95-100℃。加热可以使用普通的水浴锅，也可以使用微波炉加热。如使用微波炉加热，需注意避免暴沸和过多的水分蒸发。随后大约在 20-30 分钟内冷却至室温。用免疫染色洗涤液洗涤 1-2 次，每次 3-5 分钟。随后即可进行封闭等后续的免疫染色步骤。
3. 对于其它样品抗原修复，可参考石蜡切片或冰冻切片步骤进行。
