柠檬酸钠-EDTA 抗原修复液（40×）说明书

Cat number：KFS004

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一、试剂盒说明

柠檬酸钠-EDTA 抗原修复液是一种常用的抗原修复液，结合了柠檬酸钠和 EDTA 进行抗原修复的优点，可以用于石蜡切片、冰冻切片等样品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复。细胞或组织用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后，会导致蛋白之间的交联(cross-link)，从而遮蔽样品的抗原位点，导致免疫染色时染色信号减弱，甚至出现一些假阳性染色结果。

本抗原修复液采用了常用的柠檬酸钠缓冲液和 EDTA，结合了两者修复抗原的优点，并经过适当优化，可以更加有效地去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联，充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位，从而大大改善免疫染色效果。

通常石蜡切片都需进行抗原修复处理，而冰冻切片可以不进行抗原修复处理。抗原修复会大大改善石蜡切片的免疫染色效果，但对于冰冻切片的染色效果很多文献资料表明也有显著改善。特别是当冰冻切片免疫染色效果欠佳时，可以考虑尝试进行抗原修复。从原理上来看，无论冰冻切片还是细胞爬片等，只要是用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定的样品，进行抗原修复都会有效去除蛋白。

一个包装的本产品可以配制成 5000 毫升抗原修复液(1X)。按照每个片子需要 10 毫升抗原修复液(1X)计算，一个包装的本产品可以用于 500 个样品。

二、试剂盒组份

三、使用注意事项

抗原修复过程可使用染色缸和染色架或邮寄夹进行操作。塑料染色缸、染色架和邮寄夹可以很好地耐受沸水浴，而玻璃染色缸需避免骤冷骤热导致的玻璃破碎。

抗原修复液使用前必须用重蒸水或 MilliQ 水稀释 10 倍，配制成抗原修复液(1X)。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

四、操作方法

1. 对于石蜡切片：

a. 脱蜡：切片在二甲苯中脱蜡 5 分钟，再换用新鲜的二甲苯脱蜡，共用二甲苯脱蜡3次,无水乙醇 5 分钟，两次。90%乙醇 5 分钟，两次，70％乙醇 5 分钟，一次。蒸馏水 5 分钟，两次。

b. 抗原修复：将切片浸泡在抗原修复液(1X)中，95-100℃加热约 20 分钟(加热时间可以控制在 10-30 分钟内，的加热时间需根据不同的样品和目的蛋白自行摸索)。抗原修复液(1X)使用前需预热到 95-100℃。加热可以使用普通的水浴锅，也可以使用微波炉加热。如果使用微波炉加热，需注意避免暴沸和过多的水分蒸发。随后大约在 20-30 分钟内冷却至室温。用免疫染色洗涤液洗涤 1-2 次，每次 3-5 分钟。随后即可进行封闭等后续的免疫染色步骤。

2. 对于冰冻切片：

用免疫染色洗涤液洗涤切片 5 分钟。将切片浸泡在抗原修复液(1X)中，95-100℃加热约 20 分钟(加热时间可以控制在 10-30 分钟内，加热时间需根据不同的样品和目的蛋白自行摸索)。

抗原修复液(1X)使用前需预热到 95-100℃。加热可以使用普通的水浴锅，也可以使用微波炉加热。如使用微波炉加热，需注意避免暴沸和过多的水分蒸发。随后大约在 20-30 分钟内冷却至室温。用免疫染色洗涤液洗涤 1-2 次，每次 3-5 分钟。随后即可进行封闭等后续的免疫染色步骤。

3. 对于其它样品抗原修复，可参考石蜡切片或冰冻切片步骤进行。