-20℃避光保存,一年有效。WST-1粉末溶解后,4℃避光可以保存一周,-20℃避光可以保存半年(宜适当分装,尽量避免反复冻融)。
注意事项:
由于使用96孔板进行检测,如果细胞培养时间较长,一定要注意蒸发的问题。一方面,由于96孔板周围一圈容易蒸发,可以采取弃用周围一圈的办法,改加PBS,水或培养液;另一方面,可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方,以缓解蒸发。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:
1. WST-1溶液的配制:把1毫升电子耦合试剂加入到WST-1粉末中,完全溶解即成WST-1溶液。WST-1溶液4℃避光可保存一周,而不影响使用效果。短期内不使用的WST-1溶液,分装后可以-20℃避光保存半年(尽量避免反复冻融)。冻存的WST-1溶液溶解后可能会观察到一些沉淀物,这是正常现象,37℃水浴孵育2-10分钟,通常可以完全溶解。
2. 通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等因素决定)。按照实验需要,进行培养并给予0-10微升特定的药物刺激。
3. 每孔加入10微升WST-1溶液。如果起始的培养体积为200微升,则需加入20微升WST-1溶液,其它情况以此类推。可以用加了相应量细胞培养液和WST-1溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。
4. 在细胞培养箱内继续孵育0.5-4小时,对于大多数情况,孵育1-2小时就可以了。时间长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定,初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测,然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。图3为HT-1080细胞在不同时间测定的细胞数量曲线。





