猪瘦素，LEP，检测试剂盒

猪瘦素，LEP，检测试剂盒说明书Elisa检测试剂盒专业售后服务提供代测：规格：96T/48T试剂盒说明书：48孔配置一份/96孔配置一...

猪瘦素，LEP，检测试剂盒说明书Elisa检测试剂盒专业售后服务提供代测：
规格：96T/48T
试剂盒说明书：48孔配置一份/96孔配置一份
种属:人、大鼠、小鼠、兔、猪、犬、猴、马、牛、羊、鸡、鸭、鱼等,多年专业酶免服务，质量保证，提供代测服务

 

猪瘦素，LEP，检测试剂盒Elisa试剂盒操作步骤
实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。
1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。
为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液100μl(取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制)，37℃,60分钟。
3. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
4. 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同生物素标记抗体工作液) 100μl，37℃，60分钟。
5. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色(30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止)。
7. 依序每孔加终止溶液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后15分钟以内进行检测。
猪瘦素，LEP，检测试剂盒包装规格：

48孔配置	96孔配置	保存
说明书	1份	1份
封板膜	2片(48)	2片(96)
密封袋	1个	1个
酶标包被板	1×48	1×96	2-8℃低温保存
标准品	0.5ml×1瓶	0.5ml×1瓶	2-8℃低温保存
标准品稀释液	1.5ml×1瓶	1.5ml×1瓶	2-8℃低温保存
酶标试剂	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃低温保存
样品稀释液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃低温保存
显色剂A液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃低温保存
显色剂B液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃低温保存
终止液	3ml×1瓶	6ml×1瓶	2-8℃低温保存
浓缩洗涤液	(20ml×20倍)×1瓶	(20ml×30倍)×1瓶	2-8℃低温保存

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  细胞培养上清：
检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。
  培养细胞
检测细胞内的成份时，用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
  组织标本
切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4)，或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

 

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