HR0332-250T Bradford蛋白定量试剂盒

Bradford法（考马斯亮蓝法），是目前灵敏度最高的蛋白质测定法之一。当Bradford 染色液（考马斯亮蓝G250）和蛋白在酸性条件下结合时，溶液颜色由棕黑色转为蓝色，最大吸光值波长由456nm 转至595nm，吸光值与蛋白质的含量在一定浓度范围内有较好的线性关系，通过测定吸光值大小并对照标准蛋白的吸光值，推算出蛋白浓度，实现

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试剂盒以外自备试剂和仪器：

●分光光度计 ●酶标仪 ● 移液器 ● 纯水

注意事项：

● Bradford法对于去污剂敏感的，受高浓度去垢剂影响。需确保SDS低于0.1%，Triton X-100低于0.1%，Tween 20,60,80低于0.06%。含去垢剂的样品推荐使用我公司的BCA蛋白浓度测定试剂盒。

● 染色液使用前请混匀。

● 将G250染色液放置到室温再使用，有利于提高检测的灵敏度。

● 由于Bradford法在蛋白浓度增高到一定时候，颜色反应并不成比例增加，因此得到的标准曲线只是在一定范围内可以近似看成直线，每次应按照实际测得的标准曲线计算出相对精确的蛋白浓度。

● 反应在5分钟后显色充分，但在10分钟后可能开始出现沉淀，故建议在加入染色液后5-10分钟内完成检测，误差较小。

● 最好使用塑料比色皿，如使用玻璃比色皿或石英比色皿，使用后立即用少量95%的乙醇清洗。

使用方法：

A、96孔酶标板测定：

1、蛋白标准工作液配制：

根据样品数量配制相应体积的蛋白标准工作液。将蛋白标准储存液用双蒸水5 倍稀释，配成1mg/mL的工作液。

2、标准曲线绘制。

取一块酶标板，按以下表格数据加入试剂：

3、振荡混匀后，室温放置5-10分钟。

4、用酶标仪测定A₅₉₅，以不含BSA的光吸收值为空白对照。

5、以蛋白含量（μg）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线。

6、样品测定：

将待测蛋白样品用去离子水稀释至适当浓度，取10μL样品，加入100μL 2×Bradford染色液和90μL的纯水，混匀后放置5-10分钟，然后以0号孔为对照，测定样品吸收值A₅₉₅。

【注】：

● 必须用纯水补足体积，不能用PBS等buffer。

7、根据测得的吸收值，在标准曲线上即可查得样品的蛋白含量。

8、计算蛋白浓度：

以查得的蛋白含量除以样品体积10μL，再乘以相应的稀释倍数即可得到待测样品的实际浓度。

B、比色皿测定

按照比色皿规格，与以上方法相同，适当按比例增加各溶液体积即可。

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